论文部分内容阅读
目的 通过全外显子组基因测序技术(Whole-exome sequencing,WES)对特发性全面性癫痫(Idiopathic generalized epilepsy,IGE)患者进行测序,筛选出其中具有CACNA1H基因突变伴或不伴有其它基因突变的患者,从基因到临床,探究CACNA1H基因突变与IGE各亚型之间的关系,为具有CACNA1H基因变异的IGE患者的个体化治疗提供理论依据。方法 依据2001年国际抗癫痫联盟(International league against epilepsy,ILAE)对IGE的定义,收集2015年6月-2017年6月就诊于我院神经内科癫痫专科门诊确诊为IGE的患者153例进行WES。通过先证者WES结果筛选出具有CACNA1H基因突变伴或不伴有其它基因突变的病例入组。首先通过Sanger测序法对筛选出的突变位点进行一代验证,确定最终入组人员。其后参考美国医学遗传学和基因组学会(American college of medical genetics and genomics,ACMG)指南对所有变异位点进行评级,明确变异性质。最后,分析所有患者的临床及遗传学特征。结果 自2015年6月至2017年6月在我院神经内科门诊诊断为IGE并行WES的153例患者中,具有CACNA1H基因突变伴或不伴有其它基因突变的共有38例,其中男性19例,女性19例,年龄为4~33岁,发病年龄为1~25岁。WES结果显示:38例患者中具有CACNA1H基因30个突变位点,其中有25个错义突变,2个剪切位点突变,2个截短突变,1个非编码区突变。有些患者还同时具有其它基因的变异,包括:SCN9A、GPR98、CLCN2、CASR、KCNT1、GRIN2A、PRRT2等。其突变频次由高到低前四位依次为SCN9A(6例)、GPR98(6例)、CLCN2(3例)、CASR(3例)。1.153例诊断为IGE并行WES的患者中,具有CACNA1H基因突变伴或不伴有其它基因突变的有38名,占24.8%;这38例患者,共具有CACNA1H基因的30个突变位点。根据ACMG指南共识,我们从30个突变位点中,筛选出致病或可能致病位点5个,包括2个截短突变:p.728,Y>Xfs1、p.171,W>X(2177);3个错义突变:p.E282K、p.A748V、p.G773D。其余均为意义未明的变异位点(Variance unknown site,VUS);2.38例具有CACNA1H基因突变的患者包括IGE中的数种常见及罕见亚型,其中仅有全面强直阵挛发作的特发性全面性癫痫(Epilepsy with generalized tonic-clonic seizures only,EGTCS)12例、青少年肌阵挛性癫痫(Juvenile myoclonic epilepsy,JME)12例、全身性癫痫伴热性惊厥附加症(Generalized epilepsy with febrile seizures plus,GEFS+)/热性惊厥附加症(Febrile seizures plus,FS+)4例、儿童失神癫痫(Childhood absence epilepsy,CAE)/青少年失神癫痫(Juvenile absence epilepsy,JAE)3例、无法分类的3例、良性婴儿肌阵挛性癫痫(Benign myoclonic epilepsy of infancy,BMEI)2例、肌阵挛失张力癫痫(Epilepsy with myoclonic atonic seizures,MAS)1例及肌阵挛失神癫痫(Myoclonic absence epilepsy,MAE)1例。3.38例IGE患者中,具有CACNA1H基因致病或可能致病位点的患者共10例,包括男性6例、女性4例。其中EGTCS 3例,JME 3例,GEFS+2例,JAE 1例,BMEI 1例。其用药后总体疗效为:Seizure free 5例;发作减少>50%3例;发作减少<50%2例。而这2例发作减少<50%的患者,具有共同的CACNA1H基因p.A748V位点的错义突变。4.38例IGE患者中,仅有CACNA1H基因突变的有11例,伴有1个其它基因突变的有21例,伴有2个其它基因突变的有5例,伴有3个其它基因突变的有1例。而27例同时伴有其它基因突变的IGE患者中,6例患者具有SCN9A基因5个变异位点,6例患者具有GPR98基因5个突变位点,3例患者具有CLCN2基因2个突变位点,3例患者具有CASR基因2个突变位点,其余基因变异均为单一样本。其后,我们对这27例IGE患者中其它突变基因的变异位点进行了ACMG评级,除CASR的移码突变位点p.F714Sfs27可评级为致病变异,其余位点均为VUS。而这例具有CASR基因致病位点的患者,其CACNA1H基因的突变位点评级为VUS,其表型为GEFS+,使用LEV单药治疗后达到Seizure free。结论 1.CACNA1H基因突变在IGE患者中较为常见;2.CACNA1H基因突变可出现在IGE患者的不同亚型之中,如:EGTCS、CAE、JAE、JME、GEFS+、FS+、BMEI、MAS及MAE;3.在具有CACNA1H基因突变且伴有其它基因突变的IGE患者中,哪一个基因在癫痫的发生中起主导作用,还有待进一步研究。