论文部分内容阅读
目的NOD样受体活化MAPK和NF-κB信号途径诱导炎症反应,进而参与心血管疾病的发生发展。本研究通过分析单核细胞THP1经促炎因子IL-1β预处理后MDP再刺激诱导炎症因子的表达及其信号转导通路的活化,阐明IL-1β影响NOD2诱导的炎症反应的分子机制,为临床干预心血管疾病的发生发展提供依据。方法利用RPMI-1640培养人单核细胞THP1细胞系,不同浓度的IL-1β和MDP处理细胞。通过实时荧光定量PCR法检测细胞因子和NOD2、RIP2的mRNA表达水平;Western blot法分析单核细胞中RIP2蛋白表达的情况;应用ELISA法检测细胞培养液中细胞趋化因子(IL-8、GRO-α、GRO-β)和促炎因子(TNF-α、IL-1β)的分泌。10μM信号传导抑制剂处理细胞,western blot方法检测信号传导分子的磷酸化水平;流式细胞分析法检测NOD2的蛋白表达水平。结果1.与MDP单独刺激组比较,IL-1β能显著上调NOD2诱导的细胞因子的表达(P<0.05),具有剂量依赖性;2.MDP上调了JNK、ERK、P38和P65的磷酸性蛋白表达水平,具有时间和剂量依赖性;3.与MDP单独刺激组比较,IL-1β上调了JNK、ERK、P38和NF-κB P65的磷酸性水平,具有剂量依赖性;4.IL-1β显著上调了NOD2和RIP2的mRNA和蛋白质表达水平(均P<0.05),两者上调具有剂量依赖性;5.IL-1β显著上调了A20的mRNA和蛋白质表达水平(P<0.05),两者上调具有剂量依赖性;6.ERK抑制剂U0126明显下调促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-8、GRO-α的表达,JNK抑制剂SP600125明显下调IL-8的表达;P38抑制剂SB203580明显下调GRO-α的表达,NF-κB抑制剂Bay117082没有参与任何一种炎症因子的表达下调;7.IL-1β上调A20的表达;8.A20过表达不下调NOD2诱导的细胞因子表达。结论1.IL-1β通过上调NOD2和RIP2促进MDP诱导的细胞因子表达,其主要与ERK、JNK、P38信号通路相关;2.IL-1β诱导A20的上调,但A20不下调MDP诱导的细胞因子的生产。