【摘 要】
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目的:明确鹿红方对心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion injury;IRI)引起的大鼠H9C2心肌细胞损伤和凋亡的作用及其机制。方法:成年SD大鼠用鹿红方药液灌胃制备鹿红方含药血清。将H9C2心肌细胞随机分为4组,对照组、模型组、鹿红方组、SB203580组。其中鹿红方组加入前期研究得到的最小浓度有效剂量6%鹿红方含药血清预处理24h,SB203580组细胞用15μmol/L
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目的:明确鹿红方对心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion injury;IRI)引起的大鼠H9C2心肌细胞损伤和凋亡的作用及其机制。方法:成年SD大鼠用鹿红方药液灌胃制备鹿红方含药血清。将H9C2心肌细胞随机分为4组,对照组、模型组、鹿红方组、SB203580组。其中鹿红方组加入前期研究得到的最小浓度有效剂量6%鹿红方含药血清预处理24h,SB203580组细胞用15μmol/L的p38MAPK特异性抑制剂SB203580预处理24h。对照组细胞按正常培养,模型组、鹿红方组、SB203580组用液体石蜡封闭的方法进行缺氧/复氧处理,体外模拟缺血再灌注(IRI)心肌损伤。采用倒置显微镜观察各组H9C2心肌细胞形态的变化,CCK-8检测各组细胞存活率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;试剂盒检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH),细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)含量;Western blot法检测细胞中p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果:造模后细胞在倒置显微镜下可见细胞膜皱缩,细胞器变小,细胞核皱缩。与对照组相比,模型组、鹿红方组、SB203580组细胞存活率降低(P<0.05),培养液上清中LDH水平、细胞中MDA含量升高(P<0.05),细胞中SOD含量下降(P<0.05),细胞中p-p38MAPK水平、caspase-3蛋白水平高于对照组(P<0.05)。与模型组相比,鹿红方和SB203580预处理均使细胞存活率升高(P<0.05),凋亡率明显降低(P<0.05),培养液上清中LDH水平、细胞中MDA含量低于模型组(P<0.05),细胞中SOD含量高于模型组(P<0.05),细胞中p-p38MAPK水平、caspase-3蛋白水平低于模型组(P<0.05)。结论:鹿红方预处理可减少H9C2心肌细胞缺氧/复氧引起的氧化应激损伤及细胞凋亡,改善细胞生存率和抗氧化应激损伤的能力,其作用机制可能是通过抑制p38MAPK信号通路激活。
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