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[目的]调查宫颈癌前病变及宫颈癌患者HPV感染情况。研究hTERT基因单核苷酸多态性在宫颈癌的发生发展中的影响。并探究hTERT基因单核苷酸多态性与HPV感染、单型感染与多型感染、不同亚型感染之间的关系。[方法]收集2015年1月至2017年12月云南省肿瘤医院(昆明医科大学第三附属医院)患者宫颈组织样本,其中包括正常宫颈组70例,宫颈癌前病变组64例以及宫颈癌组99例。用PCR-膜杂交法行HPV检测及分型,比较各组间HPV病毒感染率;HPV单型感染与多型感染之间的差异,以及仅HPV 16型感染和非HPV 16型感染率之间的情况。用Taq Man探针检测三组hTERT基因已知9 个基因位点 rs2853691(C>T),rs2736122(G>A),rs10069690(C>T),rs2853676(C>T),rs2853677(A>G),rs2075786(A>G),rs2736098(C>T),rs2853690(A>G)和 rs2736114(C>T)的单核苷酸多态性,比较 hTERT基因9个位点单核苷酸多态性与HPV感染,单型感染和多型感染,HPV16型感染和HPV非16型感染之间的相关性。[结果]1 HPV感染情况1.1宫颈癌前病变患者HPV感染率为67.2%,宫颈癌患者(92.9%),差异有统计学意义(P<0.001)。1.2卡方检验结果示,宫颈癌组的单型感染率60.6%、多型感染率32.3%,癌前病变组单型感染率48.4%、多型感染率18.8%,两组间比较差异有统计学意义(p<0.001)。用Bonfettoni method两组组内进行比较,虽然宫颈癌组和癌前病变组单型感染率均较多型感染多,但差异无统计学意义。1.2.1在HPV阳性患者中,宫颈癌及宫颈癌前病变两组中均以单型感染为主,其中宫颈癌前病变组单型感染率72.09%(31/43),宫颈癌组单型感染率为65.22%(60/92)。对多型感染患者进行分析,两组均以双重感染为主,宫颈癌前病变双重感染率为23.26%(10/43),宫颈癌双重感染率为25.0%(23/92)。1.2.2将宫颈癌组及宫颈癌前病变组单型HPV感染进行不同亚型感染的分析,最常见前三位分别是16亚型(占84.6%)、18亚型(占5.5%)、52亚型(占3.4%)。1.2.3将宫颈癌组及宫颈癌前病变组多型HPV感染中进行分析,最常见前三位分别是16亚型(占42.2%)、18亚型(占21.6%)、58亚型(占11.8%)。1.3卡方检验结果示,宫颈癌组与癌前病变组16型感染率分别为78.3%、46.2%,差异有统计学意义。宫颈癌组与癌前病变组非16型感染率为11.6%和13.5%,差异有统计学意义(p<0.001)。用Bonfettoni method两组组内比较,16型感染率均较非16型高,但差异无统计学意义。2 Hardy-Weinberg平衡检验结果表明,rs2853691(C>T),rs10069690(C>T),rs285367.6(C>T),rs2853677(A>G),rs2075786(A>G),rs2736098(C>T),rs2853690(A>G)和 rs2736114(C>T)位点在正常宫颈组、宫颈癌前病变组和宫颈癌组中p>0.005,符合Hardy-Weinberg平衡。在正常宫颈组中rs2736122位点p<0.05,该位点其余各组p>0.005,符合Hardy-Weinberg平衡,考虑在该位点的癌前病变组和宫颈癌组以及其余8个SNP位点hTERT基因中(p>0.005),宫颈癌组、癌前病变组和正常宫颈组基因型分布均符合Hardy-Weinberg 平衡。3在单倍型构建中TGGCACACC在正常宫颈组和有病变宫颈组(包括宫颈癌组和宫颈癌前病变组)中比较有统计学差异(P<0.001)。4 连锁不平衡分析显示,rs2853690(A>G)和 rs2075786(A>G)、rs2853690(A>G)和 rs2736098(C>T)、rs2736114(C>T)和 rs2075786(A>G)之间存在较强的连锁不平衡关系(D’=0.978、0.985、0.881);其余各SNP位点间关联不明显(D’<0.8)。5 hTERT基因9个位点单核苷酸多态性与HPV感染、单型感染与多型感染、不同亚型感染之间的关系5.1 rs2736122各分层分析中,rs2736122位点在正常关宫颈组中AA基因型频率为8.7%、AG基因型频率为88.4%,GG基因型频率为2.9%;宫颈癌前病变组无HPV感染中AA基因型频率为0、AG基因型频率为14.3%,GG基因型频率为85.7%;宫颈癌组无HPV感染中AA基因型频率为0、AG基因型频率为14.3%,GG基因型频率为85.7%,在单型感染与多型感染、HPV16型与非16型感染,无HPV感染状态下,正常宫颈组与宫颈癌前病变组、宫颈癌组间比较,基因型频率差异均有统计学意义(p<0.001)。在单型和多型感染、16型和非16型感染中,正常宫颈组A等位基因频率为52.9%,G等位基因频率为47.1%;宫颈癌前病变组无HPV感染中A等位基因频率为7.1%、G等位基因频率为92.9%;GG基因型频率为85.7%;宫颈癌组无HPV感染中A等位基因频率为7.1%、G等位基因频率为92.9%,在单型感染与多型感染、HPV16型与非16型感染,无HPV感染状态下,正常宫颈组与宫颈癌前病变组、宫颈癌组间比较,等位基因频率差异均有统计学意义(P<0.001)。在有HPV感染各亚组中,包括单型感染和多型感染、HPV16型和非16型感染,等位基因及基因型均无统计学差异(p>0.05)。5.2 rs2853677分层分析中,在有无HPV感染亚组中,rs2853677(A>G)位点在正常宫颈组中AA基因型频率为29.9%、AG基因型频率为49.3%,GG基因型频率为20.9%;在癌前病变组AA基因型频率为23.8%、AG基因型频率为76.2%,GG基因型频率为0;在宫颈癌组AA基因型频率为14.3%、AG基因型频率为28.6%,GG基因型频率为57.1%,三组在无HPV感染状态下基因型频率差异有统计学意义(P=0.01)。在HPV16型与非16型感染亚组中,rs2853677(A>G)位点在正常宫颈组中AA基因型频率为29.9%、AG基因型频率为49.3%,GG基因型频率为20.9%;在癌前病变组AA基因型频率为23.8%、AG基因型频率为76.2%,GG基因型频率为0;在宫颈癌组AA基因型频率为14.3%、AG基因型频率为28.6%,GG基因型频率为57.1%,三组在无感染状态下的基因型频率差异有统计学意义(P=0.008)。该位点的等位基因频率无统计学差异(P>0.05)。5.3 hTERT 基因 rs2853691,rs10069690,rs2853676,rs2075786,rs2736098,rs2853690和rs2736114这7个SNP位点在三组有无HPV感染、单型和多型感染、16型和非16型感染中基因型频率和等位基因频率差异无统计学意义。[结论]1.HPV16亚型是宫颈癌前病变和宫颈癌最常见的致病亚型。其次分别为18、58和52亚型。感染HPV后是否发展为宫颈癌主要由所感染HPV亚型的致病力决定;单型感染和多型感染在宫颈癌的发生发展中无直接联系。2.rs2736122(G>A)在正常宫颈基因型以AG为主,等位基因中以A为主,可能为有益突变,但也不能排外抽样误差所致偏倚。3.rs2853677(A>G)位点在无HPV感染者中,AA基因型对于患宫颈癌来说,或为保护性基因型,可在一定程度上避免宫颈癌的发生。G等位基因则可能增加宫颈癌的发生。但该位点与HPV易感性,单型感染和多型感染、16型感染和非16型感染均无关。4.hTERT 基因 rs2853691(C>T)rs10069690(C>T),rs2853676(C>T),rs2075786(A>G),rs2736098(C>T),rs2853690(A>G)和 rs2736114(C>T)7个SNP位点的单核苷酸多态性与宫颈癌前病变及宫颈癌患者HPV易感性,单型感染和多型感染、16型感染和非16型感染均未发现相关性。