3种水稻病毒检测方法的研究与应用

来源 :浙江师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:llw88636108
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
水稻是我国最重要的粮食作物之一,但其生产常受到病毒病的影响,迄今为止,已有10多种水稻病毒病在我国发生的报道。水稻条纹病毒(RSV)、水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)、南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)是近年来在江浙一带流行最为严重的3种水稻病毒。病原的检测和诊断一直是作物病害准确预测、预报与高效防控的基础。这3种水稻病毒病害的有效防控同样也离不开准确、快速的检测技术。为此,本研究以这3种病毒为研究对象建立、发展了间接ELISA、多重RT-PCR、RT-LAMP等检测方法。首先以本实验室之前制备的RBSDV特异性抗体为基础,利用P8抗体建立了RBSDV和SRBSDV的间接ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)法,实验结果表明:当P8抗体稀释3000倍、抗原抗体反应时间为2h、显色时间为40min时,ELISA法检测结果最佳。利用上述条件对本实验室在浙江省内2010年-2011年期间所采集的白背飞虱样品进行检测,结果表明,在检测来自14个不同地区样品中,浦江县白背飞虱带毒率高达14.6%,为全省最高。接着我们针对RSV、RBSDV和SRBSDV基因组上的保守序列设计了3对特异性引物,发展了同步检测这3种水稻病毒的多重RT-PCR技术。梯度PCR实验表明这3对引物的最佳退火温度为63℃,特异性和灵敏度分析显示该方法是一种简单、快速、准确、灵敏的同步检测这3种重要水稻病毒的方法。将该方法应用于单头飞虱以及田间植物样品的检测。结果显示,在越南、上海、广东、海南、湖南、湖北、浙江等地均存在SRBSDV侵染,山东省21个县市和浙江临安等地的玉米粗缩病的病原均为RBSDV,浙江省水稻和飞虱样品中,均检测到了RSV、RBSDV和SRBSDV,表明浙江水稻病毒病原呈多样性,并存在复合侵染的情况。反转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP)技术是一种新的核酸扩增技术。本研究还针对RBSDV和SRBSDV基因组片断S10各设计了4条特异性引物建立了RT-LAMP检测方法,实验结果显示该技术可用于特异而灵敏地区分这2种病毒,可有效用于单头飞虱和病株样品的检测。此外,我们以血清学和RT-PCR检测方法为基础分析了灰飞虱和白背飞虱室内传播RSV、RBSDV和SRBSDV的特性。
其他文献
本文首先简要回顾了测控技术的发展历史,并从哲学的角度分析搞好测控专业教学所需系统工程方法;然后基于系统工程方法,提出了测控类专业创新实验室的设计思想和所必须遵循的
教学与科研是高等院校的两个首要任务,如何利用科研成果和科研条件辅助并提高教学水平始终是各高校需要解决的问题.本文结合"科研成果进课堂"工程实施情况,通过电子技术实验
本文以新建虚拟仪器技术室为契机,探讨了开放式实践教学中心的构建和管理,在此基础上进一步研究和设计了大学生的创新培养模式.实践表明,该实践教学中心的开放性管理和创新培
碘是一种人体必需的、对人类健康至关重要的必需微量元素,它是合成甲状腺激素的原料,因而具有重要的生理意义。缺碘则会给机体带来一系列的危害,严重的甚至会影响智力的发育。目
  本文总结了国防科学技术大学电子技术实验中心信息化建设的成功经验,介绍了实验室信息化建设过程中所取得的一些重要成果,深入探讨了实验室信息化进一步发展的思路。
当今,化石能源的大量消耗给自然环境,人类健康等方面造成诸多危害,为此,世界各国出台了限定燃油硫含量的法律法规。目前,加氢脱硫(HDS)作为主要的脱硫技术,可以高效的脱除硫醇,硫化物
  创新能力培养是研究型大学人才培养的核心目标,而创新离不开实践,为学员进行课内外实践提供开放的、多层次的创新实践环境具有重要意义。文章针对"仪器科学与技术"学科分析
  针对学院实训中心电工实训室现状,结合理论教学与实训实践,本文从实训设备、师资建设、教学方法等方面,对电工实训教学改革进行探讨,为培养高素质技能型人才提供服务。
  针对当前独立学院非计算机专业程序设计实验教学中存在的问题,从实验教学体系、教学内容及教学的评价等方面提出了一些改进措施。实践表明,这些措施有助于激发独立学院学生
低聚果糖(fructooligosaccharides,FOS)具有调节体内菌群平衡、降低血脂、促进矿物质吸收、排毒和抗龋齿等生理功能,是一种新型的功能性甜味剂和饲料添加剂。   目前市场上的