本实验通过筛选比较6株云芝菌种,获得较佳的液体发酵生产菌株LS,并根据摇瓶培养基的优化结果,进行30L发酵罐放大培养,28℃发酵4天,菌体干重达到24.29g/L,胞内糖肽产量达到1.63g/L,所得胞内糖肽的总糖含量为50.41%、单糖含量为0.53%、肽含量为35.77%,其HPGFC图谱与对照品图谱一致,均符合国家药品标准WS-XG-021-2002要求。进一步对培养基进行优化,得到最佳培养基组分为可溶性淀粉8%、豆饼粉4%、玉米浆粉0.2%、麸皮0.5%、KH₂PO₄ 0.15%、MgSO₄ 0.02%;最佳培养条件为:培养基的起始pH5.0、温度26℃、装液量50ml/250ml和接种量10%。在这些条件下培养6天,其菌体干重为35.001g/L,其胞内糖肽产量从原先摇瓶时的0.718g/L提高到1.726g/L。对云芝胞内糖肽的提取工艺条件进行了深入的研究。采用匀浆法处理云芝菌丝体时,其最佳提取工艺为:提取温度80℃,水料比为6:1,提取时间2小时,提取次数2次,加3倍体积的无水乙醇沉淀,醇沉温度4℃。在上述条件下,胞内糖肽提取率为66.86mg/g。此外,对不同的提取工艺进行了比较。对云芝胞内糖肽的性质进行了初步鉴定,研究发现其总糖含量为64.41%、单糖含量为0.22%、肽含量为22.23%,其液相色谱图与云芝胞内糖肽对照品的液相色谱图基本一致,其中有效成分峰的分子量为27207Da,归一化含量为20.60%,比对照品相对应的归一化含量1.93%高,均符合国家药品标准WS-XG-021-2002要求。在190-400nm区间进行紫外扫描,出现蛋白结合多糖的特征。通过红外光谱分析,具有α-和β-两种类型的糖苷键。气相色谱分析表明云芝胞内糖肽的组成单糖为阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。最后,对云芝胞内糖肽和胞外多糖进行了氨基酸分析,结果表明两者都含有17种氨基酸,其中必需氨基酸含量分别占氨基酸总量的29.45%和17.85%。