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实验目的 骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类存在于骨髓间质中具有多向分化潜能的干细胞。近年应用MSCs移植修复中枢神经系统损伤和治疗神经系统的各种疾病已成为神经科学研究热点。然而成体骨髓中MSCs的比例非常小,并且在体外培养MSCs过程中其增殖和分化率均有所下降。这些都限制了MSCs在细胞和基因治疗中的应用。 本实验单独及联合应用碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growthfactor,bFGF)和维生素C作用于体外培养的MSCs,以寻求体外快速、大量增殖MSCs的有效方法,并将增殖后的MSCs移植入大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠体内检测其在体内的生长情况。从而为神经系统疾病的治疗中提供足够数量具有高生物学活性的MSCs种子细胞提供新的思路。 实验方法 1.体外分离纯化MSCs,进行原代和传代培养。取第3代MSCs根据培养液中加入不同影响因子分为4组:(1)对照组(2)维生素C组(3)bFGF组(4)维生素C+bFGF组。继续培养,逐日观察各组细胞的生长状况和形态变化特点。 2.免疫细胞化学技术测定各组细胞表面抗原CD29、CD34、CD44的表达,判定所培养细胞中是否存在造血细胞和内皮细胞的污染。 3.将第3代MSCs接种在24孔板和96孔板内,根据分组加入相应浓度维生素C和bFGF进行培养,绘制各组细胞的生长曲线。MTT法测定1、2、3、5和7天吸光度A值,结果进行统计学分析。