第一部分 敲低ACTL6A促进APL细胞分化背景与目的:肌动蛋白样6A(ACTL6A,Actin like 6A),是Arps家族成员之一,与肌动蛋白共同组成了染色质重构酶复合体。在多种肿瘤疾病中发挥着抑制分化等重要作用。然而,ACTL6A在急性早幼粒细胞白血病(APL)中尚未见报道。本研究主要探讨敲低ACTL6A对APL细胞分化的影响。方法:通过分析NCBI数据库中APL cDNA芯片(GSE12662)的数据,确定ACTL6A在APL病人中的表达量;用ATRA人为诱导NB4、HL-60细胞株分化,用PMA人为诱导HL-60细胞株分化,观察ACTL6A的转录水平和蛋白水平的变化;利用慢病毒作为载体,在基因层面敲低ACTL6A,观察APL细胞株的分化标志物CD11b的改变;免疫荧光检测蛋白的荧光表达情况;瑞氏染色观察形态学的改变。结果:数据库分析发现ACTL6A在APL患者中相比于正常人表达上调;在ATRA人为诱导NB4、HL-60细胞和PMA人为诱导HL-60细胞的分化过程中,ACTL6A表达水平逐渐降低;同时,敲低ACTL6A促进了NB4和HL-60细胞的分化。结论:ACTL6A在APL病人中高表达;人为诱导APL细胞分化的过程中,ACTL6A表达下调;敲低ACTL6A促进APL细胞的分化。第二部分ACTL6A影响APL细胞分化的机制研究目的:探讨敲低ACTL6A促进APL细胞分化的机制。方法:敲低ACTL6A,检测Notch1信号通路的活性改变;利用免疫荧光分别检测ACTL6A和Sox2、p53的空间共定位;利用CO-IP分别检测ACTL6A和Sox2、p53的相互作用;分别用Notch1信号通路抑制剂DAPT、p53激活剂CBL0137处理APL细胞,通过Western blot和q RT-PCR检测蛋白水平和转录水平的CD11b、ACTL6A等的变化。结果:本研究发现,敲低ACTL6A促进APL分化的同时,Notch1信号通路的活性下调;ACTL6A分别和Sox2、p53存在空间共定位以及相互作用;DAPT处理APL细胞后,CD11b的蛋白水平表达上调,Notch1信号通路的表达下调;CBL0137处理APL细胞后,CD11b的蛋白水平表达上调,ACTL6A和Notch1信号通路的表达下调。结论:ACTL6A和p53的相互作用可以通过Notch1信号通路影响APL细胞的分化。