GLIPR1基因在急性髓系白血病中的甲基化及其表达研究

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背景与目的:白血病是由细胞增殖和分化成熟失衡引起的一种常见的造血系统恶性疾病,其发生发展是多因素参与、多步骤的复杂过程,涉及遗传学和表观遗传学改变。近年来的研究发现,DNA甲基化是人类白血病中普遍存在的现象,与其发病密切相关。启动子区CpG岛高甲基化(hypermethylation)是抑瘤基因、DNA修复基因、促凋亡基因失活的主要方式之一。甲基化基因不仅在白血病发病中起着重要作用,而且可能成为白血病的生物标志物和治疗靶标。GLIPR1基因是从胶质细胞瘤细胞株中克隆出来的一个新基因,研究表明,在前列腺癌等实体瘤中GLIPR1基因具有抑瘤基因的功能。Gingras等于2000年发现GLIPR1在分化成熟的单核细胞中表达上调,可作为髓系单核细胞分化的标志物,这提示GLIPR1基因可能在急性髓系白血病(acute myelogenous Leukemia,AML)中表达下调并与其发病有关。但GLIPR1基因在AML中的表达水平及其调控机制不清楚,有待进一步研究。为此,本研究检测抑瘤基因GLIPR1在急性AML细胞株和AML患者骨髓中mRNA和蛋白质的表达水平以及甲基化状态,探讨GLIPR1是否为AML的甲基化沉默基因。方法:以5株白血病细胞株,以及70例治疗前AML骨髓、57例急性淋巴细胞白血病(ALL)、40例慢性粒细胞白血病(CML)、125例对照骨髓和24例治疗后完全缓解AML骨髓为样本,采用RT-PCR和Western blotting检测GLIPR1基因mRNA和蛋白质的表达水平,采用甲基化特异PCR(MS-PCR)方法检测GLIPR1基因的甲基化状态,并对GLIPR1基因mRNA和蛋白质的表达水平与其甲基化状态的相关性进行分析。结果:(1)GLIPR1基因在AML细胞株中的mRNA和蛋白质表达水平低于CML细胞株和ALL细胞株,而甲基化水平在前者高于后者。5-aza-2dC处理细胞后,GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平明显上调,而在CML和ALL细胞株中的表达水平上调不明显;5-aza-2dC处理细胞后,GLIPR1基因在AML细胞株中的甲基化下降程度较CML和ALL细胞株明显。(2)GLIPR1基因在AML骨髓中的mRNA平均表达水平明显低于ALL骨髓、CML骨髓及对照骨髓,分别为(0.38±0.20VS 0.76±0.18)、(0.38±0.20 VS 0.80±0.14)和(0.38±0.20 VS0.85±0.12),在完全缓解AML骨髓中的平均表达水平表达明显高于治疗前骨髓(0.78±0.13 VS 0.36±0.20);而在ALL和CML骨髓中的平均表达水平与对照骨髓比较无明显差异,分别为(0.76±0.18 VS0.85±0.12)和(0.80±0.14 VS 0.85±0.12)。(3)GLIPR1基因在AML骨髓中的蛋白质平均表达水平明显低于ALL骨髓、CML骨髓及对照骨髓,分别为(0.14±0.05 VS 0.32±0.12)、(0.14±0.05 VS 0.36±0.16)和(0.14±0.05 VS 0.40±0.08),在完全缓解AML骨髓中的平均表达水平表达明显高于治疗前骨髓(0.38±0.16 VS 0.16±0.07);而在ALL和CML骨髓中的平均表达水平与对照骨髓比较无明显差异,分别为(0.32±0.12VS 0.40±0.08)和(0.36±0.16VS 0.40±0.08)。(4)GLIPR1基因在AML骨髓的甲基化阳性率明显高于ALL骨髓、CML骨髓及对照骨髓,分别为(82.8%VS 38.6%)、(82.8%VS 27.5%)和(82.8%VS16.8%),在完全缓解AML骨髓中的甲基化阳性率明显低于治疗前骨髓(17%VS 83%);而ALL和CML骨髓中的甲基化阳性率与对照骨髓比较无明显差异,分别为(38.6%VS 16.8%)和(27.5%VS 16.8%)。(5)GLIPR1基因在AML骨髓中的mRNA和蛋白质表达水平与其甲基化水平呈负相关。结论:(1)GLIPR1基因在AML中出现高频甲基化和表达下调/缺失,启动子甲基化可能是导致GLIPR1基因表达沉默的原因;(2)GLIPR1基因是AML的甲基化沉默基因;(3)GLIPR1基因甲基化水平对判断AML患者的疗效有一定意义。
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