潜伏性结核感染阻碍了宿主免疫系统对病原体的根除导致其成为结核杆菌主要储存库和结核病防治的障碍,因此诊断和预防潜伏性结核感染是如今结核病防治的关键。一组由休眠生存调节子(DosR)编码的抗原对于结核杆菌在宿主体内持续存在至关重要。近年来国内外研究显示出DosR抗原在潜伏感染的诊断和新型抗结核疫苗研发方面潜力巨大。本研究所选择的抗原Rv1737c是DosR调节子的一种,主要由潜伏期的结核杆菌表达,目前国内外关于该抗原的报道较少,大部分功能未知。目的:探索DosR抗原Rv1737c在宿主天然免疫和炎症调节中的作用及其机制,为新型抗结核疫苗的研究提供实验基础。方法:通过基因工程技术构建重组质粒pET30a(+)-Rv1737c,通过蛋白原核表达技术获得重组蛋白Rv1737c(rRv1737c)。用rRv1737c处理小鼠腹腔巨噬细胞和PMA诱导后的THP-1细胞。利用Western Blot技术和Real-Time PCR技术检测经过rRv1737c刺激后的巨噬细胞各效应分子表达。通过流式细胞术检测巨噬细胞表面共刺激分子表达,ELISA技术检测细胞上清中各细胞因子浓度,探索rRv1737c在巨噬细胞激活中的作用。利用rRv1737c和佐剂霍乱毒素B亚单位制作亚单位疫苗。用亚单位疫苗在0、2、4周免疫C57BL/6小鼠,末次免疫1周后取血检测疫苗免疫原性,2周后用高浓度BCG通过滴鼻途径感染小鼠,感染3周后检测小鼠体内免疫反应以及肺部菌落计数和组织病理损伤,评价rRv1737c在免疫保护和炎症调节方面的效果和机制。结果:rRv1737c在大肠杆菌工程菌中呈可溶性表达,通过镍柱亲和层析获得纯度较高的rRv1737c。rRv1737c通过调节IDO1表达诱导巨噬细胞耐受性表型。rRv1737c通过TLR2受体与巨噬细胞相互作用,增强了NF-κB的磷酸化和共刺激分子(CD40/CD80)的表达,促进炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8)的分泌。rRv1737c亚单位疫苗免疫后,小鼠体内能产生大量的抗rRv1737c特异性抗体(IgG、IgM和Ig A)。在感染高浓度BCG后,与对照小鼠相比,rRv1737c-CTB免疫的小鼠表现出肺部炎症损伤加重但肺部细菌负荷无差异。由rRv1737c引起的免疫效应可能与巨噬细胞表型从促炎性M1转变为以增强的IL-10产生为特征的活化M2有关。体外细胞共培养结果显示,rRv1737c处理的巨噬细胞能促进Th0细胞向Th2细胞极化和Treg增殖,细胞内流式细胞术分析进一步显示,与未免疫的小鼠相比,BCG感染后免疫的小鼠体内表达IFN-γ,IL-4和IL-10的肺CD4~+T细胞频率增加。小鼠肺细胞的培养结果显示,与对照小鼠相比,rRv1737c-CTB免疫的小鼠能产生更高水平的多种细胞因子如IFN-γ,IL-10和IL-6。结论:DosR抗原Rv1737c能上调IDO1表达并通过激活TLR2受体引起巨噬细胞活化。rRv1737c-CTB接种小鼠体内能产生较强的抗原特异性免疫应答且加重BCG感染小鼠的肺部炎症损伤,这可能是由于rRv1737c活化的M2巨噬细胞诱导Th2型免疫反应所致。