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研究背景:食管鳞状细胞癌(ESCC)是我国食管癌的主要类型。食管鳞状细胞上皮内瘤变作为ESCC的癌前病变,大大增加了 ESCC发生的风险。若无特殊干预措施,高级别上皮内瘤变(HGIN)约有65%3.5年内进展为ESCC,74%13.5年内进展为ESCC。近年来早期ESCC及其癌前病变行内镜下的微创治疗已成为趋势。研究显示,早期ESCC微创治疗的5年生存率可达85%-95%,因此早诊早治是目前提高治疗效果的有效途径。但目前尚无ESCC早期诊断分子标志物。微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类长度约21-25个核苷酸序列的非编码小RNA,主要通过碱基互补配对的方式结合到靶基因mRNA的3’端非编码区(3’-untranslated region)的互补序列,抑制靶基因的表达或促其降解,参与肿瘤等疾病的发生发展。有研究发现,ESCC组织和血清中有一些miRNA表达异常,其检测有助于疾病的诊断、预后判断、治疗等。但目前为止,关于食管鳞状细胞上皮内瘤变组织及血循环中miRNA表达情况尚无研究报道。研究目的:检测分析食管鳞状细胞上皮内瘤变组织及患者血清miRNA表达谱及ESCC患者血清分泌型miRNA,探讨作为ESCC早期诊断分子标志物的可能性。研究方法:本研究共收集了 30对通过内镜和病理确诊的食管鳞状细胞上皮内瘤变病人病变组织和正常组织。首先通过qRT-PCR方法对已报道的在ESCC组织中显著变化的 8 种 miRNA,miR-25,let-7a,miR-100,miR-133a,miR-223,miR-375,miR-483-5p和miR-1322在组织中进行检测,得到异常表达的miRNA,分析其与疾病的关系,再通过原位杂交方法进行验证,随后用qRT-PCR方法检测异常miRNA在患者血清及血清exosome中的表达情况。用生物信息学预测miRNA的靶基因。本研究同时收集了 47例ESCC患者血清和46例年龄、性别相匹配的健康对照血清,利用qRT-PCR技术检测血清exosome中miR-25,miR-223,miR-100 和 miR-483-5p 表达水平。研究结果:组织qRT-PCR结果显示:miR-25在食管鳞状细胞上皮内瘤变组织中表达较邻近的正常组织显著升高(0.290±0.448 vs 0.120±0.184,P=0.031),比例为66.7%(20/30),且miR-25水平在低级别上皮内瘤变和(LGIN)和HGIN亚型之间组无明显差异(0.037±0.051 vs 0.024±0.041,P=0.459)。而其他 7 种 miRNA在病变组织和正常组织间无显著差异。miRNA原位杂交实验证实内瘤变组织中miR-25表达明显升高。靶基因预测发现存在一些与细胞信号通路、基因表达、细胞周期阻滞和凋亡、肿瘤发生、细胞代谢等相关的基因是miR-25的潜在靶基因。内瘤变患者血清及血清exosome中miR-25的表达与正常对照相比无显著差异。ESCC患者血清exosome的qRT-PCR结果显示,患者血清exosome中miR-25和miR-223表达较正常对照明显升高(分别为0.234±0.180 vs 0.115±0.079,P=0.0003;10.920±13.113 vs 5.460±5.386,P=0.034),差异具有统计学意义;而miR-100和miR-483-5p表达升高无统计学差异。ROC曲线分析发现,exosome中miR-25和miR-223诊断ESCC的ROC曲线下面积AUC分别为0.716,95%CI:0.612～0.820 和 0.627,95%:CI 0.513～0.741,特异度分别为 0.739 和 0.783。结论:miR-25在食管鳞状细胞上皮内瘤变组织及ESCC患者血清exosome中表达升高。分泌型miR-223也高表达于ESCC患者血清。miR-25和miR-223有希望作为ESCC的诊断和早期预测的分子标志物。