【摘 要】
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目的:从理论概述、动物实验、临床典型验案分析三个方面研究补肾养血活血中药复方新加苁蓉菟丝子丸促进卵泡发育、治疗卵巢功能低下类疾病的作用机理,以期证明导师长期临床经
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目的:从理论概述、动物实验、临床典型验案分析三个方面研究补肾养血活血中药复方新加苁蓉菟丝子丸促进卵泡发育、治疗卵巢功能低下类疾病的作用机理,以期证明导师长期临床经验用方的科学依据。方法:首先阐述中西医对卵泡发育障碍的病因、病机的认识,中医补肾养血活血法在该类疾病中的治疗现状;其次,通过动物实验,对SD雌性大鼠随机分为7组,随机抽取8只蒸馏水(1 ml/100 g)灌胃作为空白对照组,其余6组按近前课题探索剂量,予雷公藤甲素(400μg/kg,60d)造模。造模成功后,分为空白组、雷公藤甲素组、西药组、中药高低剂量组、通路抑制剂+中药高剂量组。分别按实验设定的剂量给药。连续灌胃2周后,采血检测血激素水平、进行血液流变学分析;采血后处死大鼠,取出卵巢并称重,切片染色观察卵巢组织学形态,并提取蛋白和RNA,采用流式细胞术、聚合酶链反应检测PI3K、Akt、m TOR、Lamp2、Cathepsin-D蛋白及基因的表达水平;最后,择选导师临床中运用新加苁蓉菟丝子丸治疗卵泡发育障碍类疾病的完整验案3例,并对其疗效进行分析。结果:(1)与正常对照组相比,雷公藤甲素模型组大鼠动情周期延长紊乱,闭锁卵泡数增多,FSH、LH升高,卵巢湿重、卵巢指数、E2、AMH水平下降,各级卵泡、黄体数、颗粒细胞层厚度减少,差异均有统计学意义(p<0.01)。(2)与模型组相比,西药组及中药高、低剂量组卵巢指数、卵巢湿重、E2、AMH水平增加,闭锁卵泡数减少,FSH、LH下降,各级卵泡、黄体数、颗粒细胞层厚度增多,差异均有统计学意义(p<0.01),且中药高剂量组与西药组效果相当。(3)与模型组相比,西药组及中药高、低剂量组自噬相关分子LAMP2、Cathepsin-D的表达下调,且m RNA水平与蛋白水平一致,差异具有统计学意义(p<0.01),信号通路轴相关蛋白PI3K、AKT、m TOR的磷酸化水平显著上升(p<0.01),但对其m RNA无明显影响,而加入通路抑制剂后,中药高剂量组对上诉分子的影响能力消失,差异具有统计学意义(p<0.05或p<0.01)。结论:(1)雷公藤甲素造模后,大鼠出现动情周期紊乱,激素、卵巢组织学等符合卵巢功能损伤的表现,说明雷公藤甲素可成功建立卵泡发育障碍模型。(2)新加苁蓉菟丝子丸可改善大鼠血清激素水平、增加卵巢指数及卵巢湿重,恢复各级卵泡、黄体数,增加颗粒细胞层厚度。(3)新加苁蓉菟丝子丸可显著下调全血黏度、红细胞聚集指数、血沉指数,在补肾的基础上,发挥中药复方活血养血的功效。(4)雷公藤甲素致大鼠卵巢功能损伤可能是通过调控PI3K/AKT/m TOR通路从而诱导细胞自噬所致;补肾养血活血中药复方新加苁蓉菟丝子丸通过下调自噬相关分子LAMP2、Cathepsin-D的表达,从而促进卵泡发育,修复受损的卵巢功能。
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