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目的:多形性胶质母细胞瘤（multiforme glioblastomas,GBMs）是一种原发于脑组织,最具侵袭性和致命性的恶性肿瘤之一,目前缺乏有效的治疗手段,开发新型有效的治疗方案具有重要的临床意义。分子靶向治疗技术相对于传统的治疗手段具有更好的选择性和特异性,是目前肿瘤治疗领域的研究热点之一。表皮样生长因子受体（Epidermoid mutation growth factor receptor,EGFR）在胶质母细胞瘤中高表达,达50%;EGFR容易发生突变,表皮样生长因子受体突变体Ⅲ型（Epidermoid mutation growth factor receptor viriant typeⅢ,EGFRvⅢ）是它的最常见突变体,特别是在GBMs患者中,30%的患者会存在EGFRvⅢ基因突变,其在肿瘤细胞中特异性表达而不存在于正常组织中,是GBMs靶向治疗的理想靶点。目前已经有一些药物用于EGFR的靶向治疗且取得一定临床效果,但是在GBMs的治疗中却收效甚微,如何克服该类靶向药物的原发性或继发性耐药,因其细胞信号通路机制复杂,目前仍是一大挑战。TNF-JNK-Axl-ERK信号通路参与EGFR在肿瘤生长及迁移中的作用。据此,本项目针对EGFR和TNF在细胞内信号转导机制的关联设计双靶点联合进行靶向治疗方案。并通过体外分子、细胞生物学及体内裸鼠移植瘤动物模型评价联合方案的治疗作用,并在分子水平研究其协同抗胶质瘤的作用机制。本项目的成功实施有望为GBMs分子靶向联合治疗提供依据,具有重要的理论意义和临床实用价值。方法:体外培养U87胶质瘤细胞,转染高表达EGFR U87细胞,分别予EGFR抑制剂afatinib、TNF抑制剂pomalidomide及两种药物联合使用,并在EGFR阳性GBM U87异种裸鼠移植模型中检测EGFR抑制剂和TNF抑制剂的联合作用。用MTT法检测细胞活力,Western blot检测EGFR、p38、ERK和JNK蛋白,q RT-PCR检测肿瘤坏死因子m RNA,Elisa法检测肿瘤坏死因子α蛋白。用TNF si RNA干扰敲低表达EGFR的U87细胞的TNF,评估其对EGFR抑制剂的耐药性影响。结果:（1）单独使用EGFR抑制剂后,表达EGFR的人恶性胶质瘤U87细胞系肿瘤坏死因子TNF被快速激活。（2）抑制TNF可增强EGFR抑制剂对胶质瘤细胞的体外抑制作用。（3）抑制TNF可增敏小鼠胶质瘤对EGFR抑制剂的体内抑制作用。（4）机制上,抑制TNF可显著降低肿瘤细胞丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPKs）的活性,表现为p38、ERK和JNK磷酸化表达的降低,导致TNF诱导启动的JNK-Axl-ERK信号传导通路的激活受抑制。结论:本研究结果证实EGFR与TNF抑制剂对肿瘤的增殖、侵袭抑制具有协同效应;EGFR抑制剂与TNF抑制剂联合应用对EGFR阳性的GBMs患者的治疗具有潜在的临床意义。目的:CXCL12又称基质细胞衍生因子-1（CXCL chemokine ligand 12,CXCL12）,是细胞因子超家族成员之一,趋化因子受体4（CXC receptor 4,CXCR4）是CXCL12单一的特异性受体,是一种G蛋白偶联受体,它具有高度保守性特点。CXCL12-CXCR4轴在恶性肿瘤的细胞增殖和侵袭中发挥重要作用,胶质瘤恶性程度越高,其表达量也会增加,针对CXCL12-CXCR4的分子靶向治疗可以有效的减少肿瘤细胞的增殖与迁移,抑制肿瘤新生血管的形成。本项目利用CXCL12的晶体结构结合计算机辅助药物设计具有CRCR4抑制剂基本功能结构、裁剪具有药物毒性作用化学结构的CXCR4小分子抑制剂。并通过体外分子、细胞生物学评价该小分子抑制剂的治疗作用,在分子水平上研究其抗胶质瘤的作用机制。本项目的成功实施有望给GBMs分子靶向治疗提供新的治疗药物,具有一定的理论意义和临床实用价值。方法:开发一种新型的含吡啶酰胺支架的CXCL12的特异性受体CXCR4抑制剂CPZ1344。通过MTT法评价CPZ1344对肿瘤细胞U87、U251、SHG44的抑制作用,通过流式细胞仪和TUNEL实验评价细胞凋亡,通过流式细胞仪检测细胞周期,通过小管形成试验评估CPZ1344作用后的肿瘤血管形成能力。采用Western blot检测CPZ1344干预后肿瘤细胞的CXCR4,p-AKT和p-m TOR表达。结果:（1）胶质母细胞瘤CXCR4高表达。（2）CPZ1344对U87胶质瘤细胞的增殖和侵袭具有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡。（3）CPZ1344诱导肿瘤细胞G1期细胞周期阻滞。（4）CPZ1344阻断部分CXCR4信号通路,CPZ1344处理后细胞CXCR4表达水平降低,p-AKT和p-m TOR表达水平也显著降低。（5）CPZ1344同时能够抑制人脐静脉内皮细胞（HUVCE）小管形成,具有较强的体外抗血管活性。结论:本研究结果证实CPZ1344对人过表达CXCR4的GBM的具有显著抗肿瘤作用,并有可能发展成为一种胶质瘤治疗药物。