外泌体介导的microRNA在肺腺癌细胞对顺铂耐药中的作用及机制研究

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目的:研究外泌体在肺腺癌细胞对顺铂的耐药过程中发挥的作用及可能的作用机制。材料与方法:采用超速离心法提取人肺腺癌A549细胞及A549细胞对顺铂的耐药株(A549/DDP)细胞培养上清中的外泌体,并经透射电镜及Western blot验证。使用细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞对顺铂的半数致死量(the inhibitory concentration to produce 50%cell death,IC50),流式细胞术检测细胞的凋亡率及细胞周期分布。使用芯片分析A549及A549/DDP细胞及外泌体中microRNA表达谱的情况。筛选出外泌体中差异表达最显著的miR-100-5p进一步研究。利用脂质体lipofectamine2000转染细胞。分别在体内及体外实验中,采用实时荧光定量PCR技术检测细胞及外泌体中miR-100-5p 和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达水平。使用Western blot及免疫组化检测细胞及组织中mTOR蛋白的表达情况。结果:1.A549/DDP细胞分泌的外泌体可以向A549细胞传递对顺铂的耐药性;2.芯片结果表明A549细胞和它分泌的外泌体之间以及A549/DDP细胞和它的外泌体之间的microRNA表达谱具有正相关性;3.microRNA-100-5p可以通过靶向mTOR影响肺腺癌细胞对顺铂的敏感性,并且可通过外泌体来传递信息;4.体内实验证明外泌体中的microRNA-100-5p可以改变裸鼠肺腺癌移植瘤对顺铂的敏感性。结论:A549/DDP细胞可以通过外泌体将对顺铂的耐药性传递给A549细胞,并且通过外泌体传递microRNA-100-5p可能是其改变对顺铂耐药性的一个机制。
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