对虾白斑综合症病毒极早期基因的研究

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对虾白斑综合症病毒(WSSV)是困扰对虾养殖业最主要的病原体,目前人们对它的侵染机制还缺乏了解。本研究在建立WSSV体外感染模型的基础上,应用蛋白质合成抑制剂来阻断病毒早期、后期基因的转录,然后通过基因芯片的方法筛选病毒的极早期基因,共获得了27个在极早期样品中特异表达的阳性探针,其中包括了24个候选的极早期基因(>100aa)。通过RT-PCR方法以及转录时相分析对这些候选基因进行验证,最终鉴定了16个WSSV的极早期基因(包括一个已知的极早期基因iel),其中12个基因在WSSV基因组中呈基因簇分布。进一步分析表明WSSV的极早期基因编码了至少3类调控因子:包括4个具有转录激活能力的核蛋白WSV051,WSV069,WSV079,WSV100;1个细胞核内的蛋白激酶WSV083,以及1个定位于核膜与中心体上的泛素连接酶E3,WSV249。这些极早期蛋白可能通转录调控,翻译后修饰等方式对病毒的复制以及宿主细胞进行精密的调控,对它们的进一步研究将有助于揭示WSSV的感染机制,建立有效的防治方法。此外,由于DNA病毒极早期基因启动子是基因工程中强启动子的良好来源,本研究还对WSSV极早期基因的启动子区进行了克隆分析,并检验了它们启动基因转录的能力。结果表明wsv051,wsv069,wsv083,wsv108,wsv249的启动子在在昆虫细胞表现出很强的活性;而wsv249的启动子还可以在螯虾原代细胞中启动基因表达。因此这些启动子在构建基因工程表达载体,特别是适用于虾类的表达载体上有一定的应用前景。
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