马立克氏病病毒在鸡体内的复制动力学研究

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马立克氏病(Marek’s Disease,MD)是由马立克氏病病毒血清1型(Marek’s disease virus serotype 1,MDV1)引起的鸡高度接触性淋巴细胞增生性疾病。该病广泛流行,是一种严重危害家禽的传染病。MDV1的致病机制比较复杂,病毒在体内的复制情况也不是十分清楚。一些研究表明,MDV1在体内复制的各阶段与MD病程存在对应关系;MDV1在体内的复制状况与其致病性及传播能力直接相关;通常,引起鸡MD高发病率、高死亡率的MDV1强毒具有在鸡体内复制率高的特性。本实验选择近年从国内不同地区MD暴发鸡场分离的6株MDV1强毒株/超强毒株、弱毒疫苗814株和国内标准MDV1强毒J-1株,分别人工感染SPF鸡。采用TaqMan探针双重荧光定量PCR(fluorescent quantitative polymerase-chain reaction,FQ-PCR)方法,动态检测感染后1~28d病毒在淋巴细胞、羽髓、脾脏、胸腺、肝脏、肾脏和脑的复制状况。意在研究不同致病力MDV1在鸡各组织脏器的复制动力学特性,探索MDV1体内增殖规律与其致病性的关系。同时对近年国内MDV1流行株与80年代分离的国内标准MDV1强毒J-1株进行比较,以期发现流行株在复制动力学方面具有的新特性。研究结果表明:1.接种后7d羽髓中病毒含量开始显著增加,各株病毒在淋巴细胞、胸腺、脾脏、脑、肾脏、肝脏中载量在接种14d左右开始明显小于其在羽髓中的载量。羽髓中病毒14~21d达到高峰,强弱毒株病毒载量达到高峰的时间相近,超强毒株峰值处病毒载量可达到107copies/106 cells,峰值期的病毒载量是感染前期(1~7d)的100~10000倍。2.胸腺和脾脏中病毒载量在感染的第5~7d出现高峰,超强毒株峰值处病毒载量可达到107copies/106cells,7~10d时病毒载量降低,随后稳定缓慢上升。3.强毒株与弱毒株相比,前者在体内的病毒载量更高,复制能力更强。本实验系统的绘制了MDV1疫苗814株和国内标准强毒J-1株在体内各组织脏器的复制动力学曲线,并对近年国内不同地区MDV1现地分离株在体内的复制动力学进行研究。研究表明,MDV1致病性与在其在体内的复制能力显著相关。国内流行株复制动力学特性与多年前的强毒株相比发生显著变化,在鸡体内增殖能力更强,并且能达到更高的载量水平。溶细胞感染期,在胸腺、脾脏中的病毒载量达到最大值,并且显著高于其它组织或脏器。感染14d后羽髓中病毒载量显著高于其余组织脏器。MDV强毒株在羽髓中的载量均能达到106copies/106cells以上,这可作为MD诊断的参考指标。本论文首次准确地定量研究了不同毒力MDV1毒株及MDV1流行毒株在鸡体内不同组织、器官内复制规律,为MDV1的致病机制研究、流行变异、诊断及MD新疫苗的研制新提供了实验及理论依据。
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