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目的: 筛选紫红獐牙菜抗乙肝病毒的有效部位和化学成分,阐明抗乙肝病毒活性物质基础;建立药材多种有效成分的HPLC含量测定方法,为药材质量评价提供科学依据。 方法: 采用乙肝病毒基因组转染的人肝癌细胞(Hep G2)2.2.15细胞为细胞模型,样品临用前溶于DMSO配成适当浓度,检测时用培养液作2倍或3倍稀释。将2.2.15细胞接种于96孔培养板,24小时后将各浓度梯度的供试品加入96孔板中,同时设不加药物的细胞对照组,各组设3复孔,加药4天后分别更换原浓度含药培养液,加药8天后于显微镜下观察细胞病变,完全破坏为4;75%破坏为3;50%破坏为2;25%破坏为1;无病变为0。按Reed-Muench法计算半数有毒浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0)。同法将2.2.15细胞接种于24孔培养板,24小时后,以最大无毒浓度为最大上样浓度,并将最大无毒浓度作2倍或3倍稀释,共设5个梯度组,同时设不加药物的细胞对照组,各组设3复孔,加药4天后收集培养上清液并更换原浓度含药培养液,加药8天后收集培养上清液和细胞,将培养4天和培养8天的培养上清液采用放免法(RIA)检测药物对表面抗原和e抗原的抑制率,按Reed-Muench法计算半数有效浓度(IC50),然后计算出样品在2.2.15细胞培养内对HBsAg和HBeAg的选择指数(SI)。另将加药8天后收集的细胞用来提取细胞总DNA,采用斑点杂交法检测药物对细胞总DNA的抑制率,按Reed-Muench法计算出半数有效浓度(IC50),并计算出SI。 采用反相高效液相色谱法对紫红獐牙菜的全草及不同部位的五种主要有效成分即獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、芒果苷、8-O-β-D-吡喃葡萄糖基-1,5-二羟基-3-甲氧基(口山)酮、1,5,8-三羟基-3-甲氧基(口山)酮同时进行含量测定。测定条件为:色谱柱:Alltima C18色谱柱(250×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.05%磷酸水溶液;梯度洗脱:0min,甲醇20%,50min,甲醇80%,55min,甲醇100%;柱温:30℃;流速:1.0ml/min;检测波长:254nm。 结果: