本研究通过制备抗金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)的特异性抗体,建立了牛奶中SEB污染的酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)。具体包括以下四个方面的内容:1.SEB的提取与纯化从金黄色葡萄球菌发酵液中纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B。发酵液经过超滤浓缩、硫酸胺沉淀、阴离子交换色谱和分子筛色谱,获得了纯度较高的SEB。获得的毒素蛋白在SDS-PAGE电泳中呈一条条带。2.抗SEB抗体的制备以自制的SEB为免疫抗原注射BALB/c小白鼠,从抗体的产生进程来看,粗毒素免疫组在注射抗原后的第90天有明显抗体产生,纯毒素和毒素对照品组在注射抗原后的第60天开始有明显抗体产生。动物产生抗体滴度逐渐上升,并在最后达到高峰,但粗毒素组滴度不及纯毒素组滴度高。间接非竞争ELISA测得其最高效价为1:100,000。3.样品中SEB的ELISA检测以自制的抗SEB抗体建立的间接竞争ELISA法对几个牛奶样品中SEB的污染情况进行了检测,所建立的间接竞争ELISA方法对SEB的检测范围为1～1000ng/mL,相关系数r = 0.9951,在此范围内对人工污染样品的平均回收率为94.5%。4.试剂盒的试制在上述研究基础上进行了ELISA试剂盒的试制,ELISA试剂盒经适当处理后,4℃放置2个月和-20℃放置2.5个月,以间接非竞争ELISA测定的吸光值分别是起始时的1/10和1/3。