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第一部分PM2.5对支气管上皮细胞VEGF表达的影响目的:观察不同浓度PM2.5悬液对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)血管内皮生长因子(vascular endothelia growth factor,VEGF)表达的影响。方法:于含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中接种BEAS-2B细胞,培养至细胞融合80%,用PBS溶液洗涤两次,加入0.25%胰酶消化,以2X105个/ml细胞密度接种于六孔板。PM2.5提取后用灭菌磷酸盐缓冲液(PBS)配置成质量浓度分别为0、25、50、100ug/ml的PM2.5混悬液。分为1)对照组,培养基中PM2.5含量为0 μg/ml;2)刺激组,培养基中加入PM2.5水溶液(其终浓度分别为 25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml),刺激 6h、12h、24h后,收集细胞培养上清,利用ELISA测定上清中VEGF蛋白水平;提取细胞全蛋白,利用Western Blot方法检测细胞中VEGF蛋白水平。结果:1.随着PM2.5浓度的升高,细胞培养上清中VEGF水平呈浓度依赖性逐渐增加,P值分别为0.001、0.0252、0.0381,差别存在统计学意义。利用Western Blot方法对BEAS-2B细胞中VEGF蛋白表达水平进行检测,BEAS-2B细胞中VEGF蛋白表达随着不同浓度的PM2.5刺激呈浓度依赖性逐步提高,P值分别为0.0279、0.0004、0.0043,差别有统计学意义。2.在同一浓度下,随着PM2.5作用时间延长,细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平逐步上升。PM2.5浓度为25μg/ml时,作用12h与作用6h比较P值为0.001,作用24h与作用12h比较P值<0.001;PM2.5浓度为50 μg/ml是,作用12h与作用6h比较P值<0.001,作用24h与作用12h比较0.003;PM2.5浓度为100 μ g/ml组作用12h与作用6h比较P<0.001,作用24h与作用12h比较P<0.001,差别均存在统计学意义结论:PM2.5可诱导BEAS-2B表达VEGF,且呈浓度和时间依赖性。第二部分丹皮酚对PM2.5诱导的支气管上皮细胞BEAS-2B表达的影响目的:观察不同浓度丹皮酚对PM2.5诱导的支气管上皮细胞BEAS-2B表达的影响。方法:BEAS-2B利用不同浓度丹皮酚(15 μ mol/L、30μmol/L)进行预处理24h,使用不同浓度PM2.5(25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml)刺激,分为对照组、PM2.5低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组分别给予丹皮酚15μmol/L、30μmol/L药物提前干预下孵育24 h,收集细胞培养上清,使用ELISA试剂盒检测上清中VEGF蛋白水平。结果:丹皮酚对基础状态下VEGF的表达无抑制作用,但可以抑制各个浓度PM2.5诱导的VEGF表达上调。对照组BEAS-2B细胞随着丹皮酚(15μmol/L、30 μ mol/L)浓度变化,VEGF水平无显著变化(P值分别为0.093、0.087);在PM2.5浓度分别为25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml时,15μmol/L丹皮酚即可抑制细胞VEGF的表达(P值分别为<0.001、0.008、<0.001);30 μ mol/L丹皮酚与15μmol/L丹皮酚相比,可进一步抑制VEGF表达水平(P值分别为<0.001、<0.001、0.015),差别有统计学意义。结论:丹皮酚可抑制PM2.5诱导的BEAS-2B细胞VEGF蛋白表达。