自噬是溶酶体依赖的细胞内成分降解的生物学过程,细胞通过自噬实现自我更新,维持重要的生命活动。脂肪组织调控糖脂代谢,在维持全身能量平衡中发挥重要作用。最近研究发现自噬调控脂肪细胞功能,从而影响肥胖引起的脂代谢异常及能量代谢失衡。因此,自噬在脂肪细胞/组织的研究可能为肥胖预防和治疗提供新的靶点和思路。目的:观察自噬溶酶体基因在肥胖个体内脏脂肪中的表达变化;探讨自噬相关蛋白survivin对脂肪细胞功能的影响。方法:1.利用正常人与单纯肥胖患者的大网膜脂肪组织进行RNA-seqence分析,观察322个自噬溶酶体基因的表达变化,同时将差异表达基因进行KEGG通路富集分析;利用GEO数据库资源,得到TNFα处理脂肪细胞不同时间点的转录谱,分析TNFα对自噬溶酶体基因的影响;细胞水平检测TNFα对自噬核心蛋白、自噬受体p62和自噬通量的影响;由于肥胖个体中炎症介导的脂肪细胞脂解增加是导致胰岛素抵抗的重要因素之一,而我们前期研究初步发现脂滴包被蛋白perilipin存在自噬性降解,所以本研究进一步观察TNFα对perilipin蛋白降解的影响,同时观察小檗碱（BBR）对脂肪细胞自噬及perilipin蛋白自噬性降解的影响。2.前期研究观察了自噬相关蛋白在小鼠不同代谢状态的表达变化,因此本文进一步检测自噬相关蛋白survivin在长期（24w）及短期（1w）小鼠脂肪组织的表达变化;分离SVF和成熟脂肪细胞,研究survivin表达变化的细胞特异性,同时观察3T3-L1脂肪细胞和C3H10T1/2多潜能干细胞分化过程中survivin的变化情况;用慢病毒过表达survivin,利用RNA-seqence技术等研究脂肪细胞survivin对成熟脂肪细胞脂质生成及脂解的影响,并研究其对TNFα引起的脂肪细胞DNA损伤和凋亡的保护作用,及探讨survivin是否具有类似NF-κB抑制剂大黄素的功能。结果:1.在肥胖内脏脂肪组织中,有50个自噬溶酶体基因表达上调且均有统计学意义;同时KEGG富集分析发现富集最显著的是TNF通路;而转录谱发现TNFα作用2h和24h时自噬溶酶体基因上调数目明显增加,然而延长作用至6d时呈显著下调,提示一定时间内炎症刺激可激活自噬,长时刺激可能损伤自噬溶酶体功能;用TNFα短时处理3T3-L1成熟脂肪细胞,发现自噬核心蛋白表达上调,自噬通量增加,p62/sqstm1的mRNA和蛋白表达均上调,促进了perilipin的自噬性降解,BBR抑制脂肪细胞自噬,使perilipin的降解减少,抑制基础脂解。2.作为自噬相关蛋白,survivin在终末分化的细胞中表达很低,对survivin的相关研究主要集中在肿瘤,关于survivin在脂肪组织/细胞的表达及对脂肪细胞功能的调控从未见报道。本研究观察到小鼠脂肪组织survivin的表达很低,高脂饮食可以诱导小鼠脂肪组织中survivin的重新表达,在3T3-L1脂肪细胞分化过程中,survivin在分化的第二天表达最高,之后逐渐降低,到第八天几乎检测不到;同样,survivin在C3H10T1/2多潜能干细胞中高表达,随着定向分化为脂肪细胞survivin的表达逐渐降低;过表达survivin不影响脂肪细胞分化,但可促进前脂肪细胞增殖和脂质合成,抑制TNFα和ISO刺激的脂解,同时抑制TNFα引起的DNA损伤修复基因的表达上调和脂肪细胞的凋亡,然而survivin对TNFα介导的炎症无抑制作用。结论:肥胖个体内脏脂肪组织存在自噬的过度激活,可能与炎症密切相关,炎症因子TNFα通过激活自噬和上调自噬受体p62的表达,以选择性自噬的方式促进脂滴包被蛋白perilipin的降解,促进脂解;而BBR通过抑制自噬抑制perilipin的自噬性降解,进而抑制脂解。自噬相关蛋白survivin在营养过剩的条件下被诱导重新表达,可能抑制慢性炎症引起脂解、凋亡和DNA氧化损伤,促进前脂肪细胞的增殖和新生,提示survivin可能促进脂肪组织在应对营养过剩条件下的良性扩张,维持脂肪组织稳态和机体能量平衡。