近年来,全球性两栖类种群数量锐减,推测其主要原因是两栖类动物生境的破坏、环境污染和感染疾病等。而两栖类因皮肤通透性高,极易受环境因子的影响,特别是环境中病原微生物已成为两栖类生存的重要环境压力之一。两栖类在长期进化过程中,逐渐建立了天然免疫防御系统以抵御环境病原微生物等有害因子的侵害。已报道的哺乳动物研究显示,Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)在固有免疫防御中起到重要作用,TLRs信号通路通过MyD88依赖途径和非依赖途径诱导下游的效应分子参与机体免疫应答。IKKs作为TLR通路中的关键分子,在MyD88依赖途径和非依赖途径中参与下游核转录因子的激活。而目前两栖类中IKKs在TLR信号通路中的作用尚不明确。本研究以东北地区优势两栖物种东北林蛙(Rana dybowskii)为研究对象,以蛙类易感菌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)为刺激源,探究嗜水气单胞菌胁迫下东北林蛙TLRs/MyD88通路中关键分子IKKs(IKK α、IKKβ和TBK1)参与免疫应答的变化及规律,为进一步了解两栖类先天性免疫提供理论依据。本研究将东北林蛙分为Ah感染组、LB(阴性对照)组和LPS(阳性对照)组,分别腹腔注射1ml的嗜水气单胞菌悬液(1×107cfu/ml)、LB液体培养基和LPS溶液(1mg/ml)。荧光定量PCR检测东北林蛙肾、肝、肺和脾脏中IKK α、IKKβ和TBK1 mRNA的表达变化。结果显示,Ah感染后4-72h IKK α、IKKβ和TBK1 mRNA的表达量均升高,LPS组变化趋势同Ah组,且IKK α和IKKβ 比TBK1 mRNA的变化更为显著。IKKα、IKK β和TBK1在肾、肝、肺和脾中的表达量存在组织特异性,尤以IKKα在肝脏中的特异性表达最为显著。Western Blot检测显示,72h内肝脏IKKα的蛋白量上调,Ah组为LB组的4.4倍(p<0.05),LPS组为LB组的5.87倍(p<0.01)。肝细胞IHC染色结果显示,肝组织中IHC阳性细胞数量增多,且IKK α、IKKβ集中于细胞质中。综上所述,嗜水气单胞菌感染东北林蛙过程中,IKK α、IKK β和TBK1均参与机体免疫应答,并以MyD88依赖途径为主,MyD88非依赖途径为辅。