集胞蓝细菌PCC 6803中SigF对pilA1转录调控的研究

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原核生物中编码SigF的基因广泛存在,但人们对其的了解主要局限在Escherichia coli、Bacillus subtilis等模式菌株中。单细胞的集胞蓝细菌Synechocystis sp.PCC 6803是常用的模式菌株之一,其基因组编码9个σ因子,被分为三大类,其中SigF属于第三类σ因子,该类σ因子主要参与调控特殊的细胞生理活动,如胁迫反应、细胞运动等,对细胞适应各种环境具有重要意义。已有研究表明在Synechocystis sp.PCC 6803中SigF可特异性地识别pilA1启动子,但SigF识别启动子序列的详细机制并不明了。本论文旨在弄清Synechocystis中pilA1启动子各个区域在SigF识别中的作用,并探究pilA1转录调控在不同蓝细菌中的保守性。在本研究中,分别以WT及△sigF为宿主菌株,构建了带有pilA1完整启动子及一系列区域突变启动子与gfp的转录融合菌株。通过酶标仪检测了各个菌株中的GFP荧光强度。结果发现pilA1启动子不同位置的碱基突变都会影响GFP荧光强度,其中AT富集区及-10区碱基的突变影响尤为显著,-35区的碱基突变影响相对较小,说明启动子-10区域及AT富集区的碱基突变对SigF调控pilA1启动子的影响较大。另外,本研究还将几种其他蓝细菌sigF基因分别转入Synechocystis △sigF中,并利用Synechocystis 启动子驱动的gfp报告基因检测了它们对Synechocystis pilA1的调控作用。同时还在Synechocystis WT中检测了其他蓝细菌pilA1启动子驱动的gfp报告基因的表达。结果显示,其他蓝细菌pilA1启动子在Synechocystis WT中有明显表达,意味着它们能够被Synechocystis SigF识别。同时,几种其他蓝细菌的SigF也能够不同程度的调控Synechocystis pilA1的转录。表明在蓝细菌中SigF对pilA1的调控是保守的。
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