矮牵牛(Petunia hybrida Var.Mitchel diploid)为茄科碧冬茄属,由于花色丰富、花期长、栽培容易,是园林应用中重要的观赏植物。矮牵牛分枝发育及抗逆性均是目前研究的热点。本研究以矮牵牛为试验材料,克隆了矮牵牛糖基转移酶PhUGT74和PhUGT74E2基因,对其序列进行了生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR对PhUGT74E1、PhUGT74E2基因在不同组织、以及干旱及盐胁迫处理下的表达进行了分析;构建了 PhUGT74E1、PhUGT74E2过表达载体以及PhUGT74E2启动子(pPhUGT74E2)融合GUS的表达载体,侵染拟南芥获得35S::PhUGT74E2过表达转基因植株。主要结果如下:(1)克隆获得矮牵牛糖基转移酶PhUGT74E1、PhUGT74E2基因。PhUGT74E1含有一个1401 bp的开放阅读框,编码466个氨基酸。该蛋白分子量和等电点分别为52.73 kDa和5.42。推测其蛋白分子式为C2374H3715N609O700S23,进化树分析矮牵牛UGT74E1蛋白与马铃薯UGT74E1蛋白亲缘关系最近;PhUGT74E2含有一个1347 bp的开放阅读框,编码448个氨基酸。该蛋白分子量和等电点分别为50.53 kDa和5.18。推测其蛋白分子式为C2278H3544N5860676S18。进化树分析矮牵牛UGT74E2蛋白与烟草UGT74E2蛋白的亲缘关系最近。(2)克隆获得PhUGT74E2基因启动子序列,长度为2083 bp。该启动子序列含有光响应元件、赤霉素响应元件、脱落酸响应元件、蛋白质结合位点等。该启动子序列存在4段核心启动子区域,可能的转录起始位点分别为A、C、A、A,分别位于第 266、987、1613、1684。(3)不同组织以及不同处理下的表达分析显示:PhUGT74E1基因在根中表达量最高,在茎和叶腋中表达量最低,约为根的1/10,而PhUGT74E2基因在叶腋中表达量最高,在顶端中表达量最低,约为叶腋的1/20;干旱及胁迫处理12 h导致PhUGT74E2表达量分别上调至对照的40.8倍和37.6倍,且随着时间的增加,表达量处于相对稳定的水平;(4)分别构建了PhUGT74E1、PhUGT74E2过表达载体以及PhUGT74E2启动子(pPhUGT74E2)融合GUS的表达载体,并且筛选出35S::PhUGT74E2过表达转基因植株。