目的:1.探讨扁蒴藤素在体外对破骨细胞分化和功能的影响并阐述相关机制;2.研究扁蒴藤素改善卵巢切除骨质疏松模型小鼠骨量丢失的作用,研究腹腔注射扁蒴藤素后小鼠体内骨组织结构及血清炎症因子的变化。方法:1.体外实验:首先使用CKK8试剂盒检测不同浓度的Pristimerin(0nM、5nM、10nM、25nM、50nM、75nM)在1、3、5天对小鼠BMMCs增殖的影响。在使用RANKL和M-CSF诱导BMMCs向破骨细胞分化过程中给予不同浓度的Pristimerin进行干预,5天后行TRAP染色及Actin环细胞骨架染色。通过骨板吸收实验检测Pristimerin对破骨细胞功能的影响。通过实时定量PCR和Western blot检测Pristimerin对NFATc1和c-Fos等破骨活性相关基因表达的影响作用。最后用Western blot方法检测NF-κB和MAPKs通路蛋白在Pristimerin处理后表达的变化。2.体内实验:通过切除C57小鼠(7周)双侧卵巢建立骨质疏松模型,将小鼠分为3组:假手术组、切除卵巢组、切除卵巢+Pristimerin组。切除卵巢后第3天开始给药,采用腹腔注射Pristimerin(1mg/kg)或DMSO溶液的方法,每周6次。给药8周后处死,取小鼠双侧股骨和眼后动脉血,左侧股骨行micro-CT扫描分析骨组织结构,右侧股骨脱钙后行TRAP染色和H&E染色分析骨组织形态,并用ELISA法检测血清炎症因子水平。结果:CKK8实验显示,当Pristimerin使用浓度≤75nM时,对小鼠BMMCs的增殖没有影响,差异无统计学意义(P>0.05)。TRAP染色结果证实Pristimerin可以显著抑制破骨细胞的形成,骨板吸收实验和Actin环染色证实Pristimerin可以显著抑制破骨细胞骨吸收的功能。q-PCR法和Western blot法证实Pristimerin显著抑制了NFATc1、CK、TRAP和MMP-9等破骨形成标志基因的表达。Western blot检测通路蛋白显示,Pristimerin抑制了IKKαβ、P65、IKB-α、P38和ERK的磷酸化水平,阻断了NF-κB和MAPKs通路的激活。体内实验方面,micro-CT扫描结果和组织切片染色提示Pristimerin显著改善了小鼠卵巢切除引起的骨量丢失。使用Pristimerin干预后,小鼠血清中TNF-α、RANKL、IL-1β、IL-6水平有所下降,而OPG水平有所上升。结论:Pristimerin可在体内外抑制破骨细胞的分化和功能,并能改善卵巢切除引起的小鼠骨量的丢失。这种作用的机制是Pristimerin抑制了NF-κB和MAPKs通路的激活。本研究为骨质疏松的治疗提供新的潜在药物。