研究背景在过去的几十年内卵巢癌仍然是妇科肿瘤中死亡率最高的恶性肿瘤,五年生存率最低[1],超过70%的患者就诊时已处于晚期,标准的手术分期和肿瘤细胞减灭术联合铂类为基础的辅助性化疗,即使暂时获得临床完全缓解,但85-90%的患者最终仍会复发和转移[2],顺铂作为临床一线化疗的铂类药物主要通过交联破坏肿瘤细胞DNA的合成及修复发挥作用,但因为卵巢癌很容易产生耐药性,实际治疗中即使是最满意的肿瘤细胞减灭术和辅助化疗也只达到50%的临床缓解率及30%的病理缓解率,平均复发时间仅为18个月[3]。所以在全球范围内卵巢癌的早期诊断及耐药逆转是非常棘手和复杂的问题,寻找代表性肿瘤生物学检测指标显得尤为迫切。干扰素介导的跨膜蛋白1(Interferon-induced transmembrane protein 1,IFITM1)属于干扰素诱导跨膜蛋白家族中的一员,其基因产物是淋巴细胞上参与传递抗增殖和同型的抗粘附信号复合体的白细胞抗原之一[4]。IFITM1在不同的肿瘤中可上调也可缺失,作用机制均不相同。近年有关其高表达的研究报道有结肠癌、肺癌、直肠癌、胃癌及头颈部鳞癌,它在恶性肿瘤发生、增殖、侵袭中的作用正日益受到广泛关注[5]。在卵巢癌基因表达分析的研究中,国外实验发现ifitm1是最有前途的新的分子标志物,而国内研究尚无报道。本研究以卵巢癌组织标本、病理切片、卵巢癌敏感细胞株a2780/卵巢癌耐药细胞株cp70为研究对象,采用免疫组织化学、免疫细胞化学、实时荧光定量pcr、westernblot、mtt、流式细胞仪检测卵巢癌组织或卵巢癌细胞中ifitm1的表达水平,研究ifitm1与卵巢癌的病理分期、肿瘤分化程度、figo(国际妇产科联盟)分期、腹水、淋巴结有无转移、化疗耐药的相关性,探讨ifitm1在卵巢癌早期诊断及化学治疗方面的意义。并进一步观察经顺铂处理a2780/cp70后ifitm1的表达水平,旨在探讨ifitm1与卵巢癌化疗耐药性的相关性,为临床预测化学治疗效果提供有意义的实验依据。目的1.观察ifitm1在卵巢癌组织中的表达,及其与临床病理因素间的关系;2.观察ifitm1表达水平与卵巢癌细胞顺铂化疗耐药之间的相关性。3.观察ifitm1sirna对卵巢癌细胞顺铂敏感性及生物学行为的影响。方法及内容1.以正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性卵巢肿瘤和卵巢上皮性癌组织为研究对象,应用westernblot及免疫组织化学检测各组织中ifitm1的表达,及其与临床病理因素间的关系。2.以卵巢癌顺铂敏感细胞株a2780和卵巢癌顺铂耐药细胞株cp70为研究对象,应用免疫细胞化学、westernblot观察ifitm1在卵巢癌细胞株中的表达。3.以顺铂处理后卵巢癌细胞株a2780/cp70为研究对象,采用实时荧光定量pcr、westernblot、mtt检测细胞中ifitm1的表达水平,分析其与卵巢癌细胞顺铂化疗耐药之间的相关性。4.以顺铂耐药细胞株cp70为研究对象,应用sirna技术沉默ifitm1基因,实时荧光定量pcr,westernblot观察转染后ifitm1的表达,mtt,细胞平板克隆,流式细胞仪,transwell法观察ifitm1sirna对卵巢癌细胞顺铂敏感性,凋亡,增殖,侵袭等生物学行为的影响。结果1.ifitm1表达强度在正常卵巢、良性卵巢肿瘤组织、交界性卵巢肿瘤组织和卵巢癌组织呈逐渐升高趋势;ifitm1的表达与上皮性卵巢癌的组织学类型、figo分期和肿瘤细胞分化程度有关,与淋巴转移、腹水无明显相关性。晚期卵巢癌组织表达率(79.1%)较早期的表达率(73.9%)增高;随着肿瘤细胞分化程度的降低,卵巢癌组织中的表达率逐渐增高;卵巢上皮性癌患者铂类耐药组中ifitm1表达强度高于铂类敏感组。2.ifitm1阳性表达定位于细胞胞膜上,顺铂耐药株cp70的ifitm1染色强度及蛋白表达水平较顺铂敏感株a2780增强。3.使用相同浓度梯度的顺铂诱导卵巢癌敏感株a2780和耐药株cp70后,ifitm1蛋白的表达水平都呈现增强趋势,并且随顺铂剂量的增加和作用时间的延长而逐渐增强,呈现出剂量及时间的同步依赖性。4.ifitm1sirna转染cp70细胞后,ifitm1mrna及蛋白的表达下调,cp70细胞的存活率降低,增殖能力降低,细胞凋亡增加,侵袭能力降低,结论1.ifitm1在卵巢癌组织中表达明显上调,提示ifitm1表达增强可能是卵巢癌的一个初始事件,与卵巢癌的发生密切相关。ifitm1的表达与上皮性卵巢癌的组织学类型、figo分期和肿瘤细胞分化程度有关,与淋巴转移、腹水无关。从实验所得的结论来看,晚期卵巢癌组织和低分化的卵巢癌组织中ifitm1表达明显增多。显示ifitm1的表达随着卵巢癌恶性生物学行为进展而增强。提示ifitm1可能成为早期卵巢癌基因诊断和病情评估的标志物。2.ifitm1在顺铂耐药细胞株cp70中的表达明显高于敏感细胞株a2780,提示ifitm1表达增高可能是卵巢癌耐药产生过程中的重要生物学机制。不同浓度的顺铂分别诱导卵巢癌敏感细胞株a2780和耐药细胞株cp70后,细胞株均表现为ifitm1蛋白水平增高,而且伴随顺铂剂量的增高和作用时间的增加,ifitm1表达也呈现逐渐增强的趋势,提示ifitm1参与了顺铂化疗耐药性的产生过程。3.IFITM1si RNA特异性沉默IFITM1的表达,能够提高卵巢癌CP70细胞对顺铂的敏感性,这提示IFITM1在卵巢癌细胞顺铂耐药及其他生物学行为中发挥重要作用。