基于免疫磁分离和酶催化放大的肿瘤标志物生物传感器的构建和应用

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近年来肿瘤性疾病严重威胁着人类的身体健康,肿瘤标志物的快速、高灵敏检测对疾病的早期诊断有着重要的意义。然而,目前肿瘤标志物的检测方法存在操作繁琐、灵敏度低、需要昂贵的试剂及仪器等缺陷。因此,开发一些简单、不需要复杂仪器且灵敏度高的肿瘤标志物检测方法具有重要的意义。液晶生物传感器以液晶作为信号转换元件,可以通过液晶光学图像丰富的织构变化来实现目标物的可视化检测,该方法与其他检测技术相比,具有成本低、操作简单快捷、无需特殊仪器设备和光源、易于实现微型化等优点。然而,目前科研工作者构建的液晶生物传感器普遍存在灵敏度偏低、抗干扰能力弱的缺点,难以满足现代分析技术的要求。基于磁球的免疫分析方法,不仅可以通过提高信号分子的固载量来实现高灵敏检测,还可以简化样品的前处理过程、缩短免疫反应时间、提高传感器的抗干扰能力。因此,为了适应临床诊断的需求,我们结合免疫磁分离和各种信号放大策略,采用液晶生物传感等高灵敏的检测方法,建立了几种灵敏度高、抗干扰能力强,且不需要复杂仪器的免疫分析方法,并将其应用于肿瘤标志物的检测,主要包括以下几部分:1.基于纳米金诱导银沉积反应与酶促金属化信号放大策略,我们构建了一种高灵敏的液晶生物传感器,并将其应用于碱性磷酸酶(ALP)的检测,然后进一步将该方法与免疫磁分离相结合实现了癌胚抗原(CEA)的可视化检测。采用纳米金修饰的玻片作为基底结合酶促金属化反应可以有效诱导银纳米颗粒沉积于基底表面,提高酶促金属化的反应速率,从而大大提高检测的灵敏度。以磁球作为免疫反应的固相载体可以实现肿瘤标志物的快速分离和富集,从而避免复杂样品对液晶生物传感的干扰,大大提高了液晶传感器的抗干扰能力。玻片基底表面所沉积的银纳米颗粒会扰乱液晶分子的有序排列,进而导致双折射信号发生变化,在偏光显微镜下观察液晶池光学图像的亮点以及颜色的变化即可实现目标物的可视化检测。该方法具有灵敏度高、抗干扰能力强、操作简单、不需要复杂仪器、检测结果可视化等优点,同时也为液晶生物传感器提供了一种有效的信号放大策略。2.将免疫磁分离、酶催化信号放大与化学发光相结合,构建了一种基于磁球的化学发光免疫传感器,并将其应用于CEA的高灵敏检测。我们以磁球作为免疫反应的固相载体,在免疫磁球表面形成以辣根过氧化物酶(HRP)作为信号的磁性免疫夹心复合物,利用磁球表面的HRP催化鲁米诺产生化学发光信号来实现CEA的高灵敏检测。采用磁球作为免疫反应的载体可以显著提高方法的检测灵敏度.该方法对CEA的检测限低至4.5 pg/mL,具有操作简单、灵敏度高、特异性强等特点,在肿瘤性疾病的早期诊断中具有广泛的应用前景。3.我们以谷胱甘肽作为配体,制备了一种稳定性好的纳米金,并将该纳米金作为晶种和催化剂,建立了一种基于金属纳米颗粒的非聚集可视化检测抗坏血酸(AA)的方法。该方法利用AA在纳米金的存在下将Ag~+还原成银单质所导致的检测液颜色变化,及纳米银410 nm处的吸光度实现AA的定性以及定量检测。该方法结合了目标诱导银沉积反应高的灵敏度以及纳米银大的摩尔消光系数,具有非常高的检测灵敏度,其检出限为0.75μmol/L。该方法具有简单、快速、所需仪器设备简单等优点,可以应用于复杂样品中AA的高灵敏可视化检测,在生物学检测领域具有广泛的应用前景。
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