苹果梨果实解袋后花青苷生物合成相关基因的挖掘与分析

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:lipengzhangchinese
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果实的综合品质由外观和内在品质共同形成,优质的果实品质能提高果实的商品价值。果皮色泽是果实外观品质的重要指标之一。苹果梨果实经过套袋处理,在采收前解袋,短期内迅速着色,而且底色变浅,着色更加鲜艳。本研究拟筛选适宜苹果梨着色的双层纸袋;研究套袋苹果梨生长发育过程中色素含量变化;并从转录组水平上分析筛选苹果梨解袋后各时期与果实色泽形成相关的差异表达基因;对花青苷生物合成过程中关键的转录因子进行克隆与表达分析,进一步探究解袋后果实迅速着色的分子机制,为苹果梨分子遗传育种提供理论依据。主要研究结果如下:1.苹果梨果实套双层袋后,果实着色指数明显提高,果点变小,果点密度降低。果实可溶性固形物、总糖、可滴定酸含量与对照相比有小幅度降低。对苹果梨平均单果重无显著影响,不同处理对果实去皮硬度影响各不相同。对本试验研究结果进行综合评价,认为绿达、绿洲双层袋是苹果梨套袋的最适宜果袋。2.苹果梨果实套袋处理90天后解除纸袋。套袋果实果皮叶绿素含量显著低于未套袋果实,未套袋果实叶绿素含量呈现先逐步升高后缓慢下降的趋势,果实套袋不仅抑制了果皮叶绿素合成,同时促进了果皮原有叶绿素的降解,使果皮叶绿素含量持续减少。3.套袋果在解袋后,花青苷含量呈现出急剧上升的趋势。这表明解袋后,果实由黑暗条件转到见光条件,花青苷合成加速,果面底色为浅黄色,果皮呈现鲜艳的红色。对照果实花青苷含量经历了上升而后下降,在果实成熟期小幅度上升的趋势。果实在套袋时期花青苷合成变化不明显,解袋后花青苷含量有大幅度上升,说明套袋抑制了果实花青苷合成。4.通过对苹果梨果实解袋后各个时期进行Illumina高通量测序,共得到91.36Gb Clean Data,各样品的Reads与参考基因组的比对效率在65.14%~66.92%之间。探明了在花青苷迅速积累阶段,差异基因表达共有1371个,其中575个上调差异表达,796个下调差异表达。采用qRT-PCR对32个花青苷合成相关基因进行表达验证,验证结果与转录组测序结果基本一致。5.构建了PbMyb4-like1、PbMyb4-like2、PbMYB1R1、PbWDR基因的过表达载体,通过冻融法导入到农杆菌GV3101中,在番茄中进行瞬时表达,转入pRI-PbMYB1R1过表达载体的番茄果实花青苷含量显著高于对照和其他处理。其他株系与对照无显著差异。
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