茄呢醇提取工艺研究和益妙保尔金米胶囊抗肿瘤活性评价

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【目的】1.建立茄呢醇的含量测定方法,对从烟叶中提取茄呢醇的工艺进行研究;2.评价益妙保尔金米胶囊的抗肿瘤活性及急性毒性。【方法】1.应用高效液相色谱法,采用DIKma C18色谱柱(150 mm×4.6mm,5μm),甲醇-异丙醇(52:48)作为流动相,流速:0.8 mL/min-1,检测波长为210 nm,进样量20μL,用标准曲线法测定茄呢醇的含量。2.以游离茄尼醇为指标,采用正交试验及比较试验,考虑提取溶剂、方法、时间等因素,对提取工序进行考察;以游离茄尼醇为指标,采用正交试验,考虑皂化物、溶剂、时间、浓度、温度、皂化溶液体积等因素,对皂化工序进行考察。3.采用改良MTT法,测定益妙保尔金米胶囊对小鼠结肠癌细胞株(CT-26)和胃癌细胞株(MFC)体外生长的抑制率,计算半数抑制浓度IC50;将40只CT-26结肠癌皮下接种模型小鼠和40只MFC胃癌皮下接种模型小鼠分别随机分成4组:阴性对照组(等体积生理盐水)、阳性对照组(香菇菌多糖片,0.5 mg/20g/日或康力欣胶囊,0.075g/20g/日)、低剂量组(益妙保尔金米胶囊粉末,0.0834g/20g/日)、高剂量组(益妙保尔金米胶囊粉末,0.2501 g/20g/日)。均采用接种5天后灌胃给药法,持续给药8天,停药24小时后,处死动物。剥离肿瘤,称重并计算抑瘤率;取出脾脏及胸腺,称重并计算脾指数及胸腺指数。【结果】1.方法学考察结果表明,茄呢醇的线性范围为0.56-2.80μg,相关系数r=0.9995,平均加样回收率100.2%(n=9),精密度RSD=1.19%;烟叶提取物中游离茄呢醇的含量在8%-12%之间。2.从烟叶中提取茄呢醇的提取、皂化工序工艺参数不同,茄呢醇收率相差极大,本实验所得较好的提取工艺为:10倍量的95%乙醇,50℃回流提取120分钟或超声波连续提取30分钟,较好的皂化条件为:在乙醇溶液中,以3倍量2.0 mol/L的NaOH为皂化试剂,60℃皂化4小时。3.益妙保尔金米胶囊无明显的抑制小鼠结肠癌细胞株(CT-26)和胃癌细胞株(MFC)体外生长的活性,对小鼠结肠癌细胞株(CT-26)和胃癌细胞株(MFC)体内生长显示出了明显的抑制作用,与生理盐水组比较,对小鼠结肠癌细胞株(CT-26)高剂量组的抑瘤率为30.26%,低剂量组的抑瘤率为25.74%,对小鼠胃癌细胞株(MFC)高剂量组的抑瘤率为29.35%,低剂量组的抑瘤率为20.53%。【结论】1.实验用茄呢醇含量测定方法具有良好的精密度、准确度和灵敏度,以此法测定游离茄呢醇的含量可行。2.益妙保尔金米胶囊粉末对小鼠结肠癌细胞株(CT-26)和胃癌细胞株(MFC)体内生长有一定的抑制作用,且无明显的量效关系。3.采取超声波提取可以大大提高原料的提取效率,从烟叶中提取茄呢醇,提取皂化工序工艺参数选择十分重要,应该进行深入研究。
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