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包埋脱水法技术基于人工种子技术发展而来,采用海藻酸钙对样本进行包裹,使样本免受化学药剂的毒害与脱水的损害。包埋脱水法有着实验操作简单,成本低,存活率高的优点。罗汉果(Siraitia grosvenorii)是中国特有的一种植物,果实有着重要药用与食用价值,目前对罗汉果进行超低温种质保存的研究较少。本文应用单因素实验与正交实验对4个品种罗汉果(龙脊,冬瓜汉,青冠,柏林3号)的茎尖进行了包埋脱水法的超低温保存研究,并对保存过程中罗汉果茎尖进行蛋白质组双向电泳及差异分析和质谱鉴定,探讨包埋脱水法保存对其基因表达调控的影响,可为罗汉果种质超低温保存提供分子基础和理论依据。主要研究结果如下:单因素实验:1.对超低温保存预培养时间进行比较,结果表明,预培养2d最佳,存活率为55%。2.不同的预培养蔗糖浓度处理表明,0.6mol/L蔗糖处理冬瓜汉茎尖效果最好,存活率为 58%。3.在不同蔗糖浓度的预培养试剂中添加10%的甘油,冬瓜汉茎尖在0.6mol/L蔗糖+10%甘油时保存效果最好,存活率为78%。4.随冬瓜汉茎尖包埋珠脱水时间延长,脱水小于4h的存活率不到10%,然后存活率上升,至脱水6h时达峰值(61%),此时的水分含量为23%。正交实验:5.对影响超低温保存的三个重要因素:预培养蔗糖浓度,预培养时间与脱水时间对罗汉果的冬瓜汉品种进行正交实验,筛选出的最佳保存条件为:0.6mol/L蔗糖预培养ld,常温下脱水6h,最高存活率60%。将其应用于冬瓜汉、青冠、伯林3号、龙脊4个品种,存活率分别为60%,42%,45%和53%,青冠和伯林3号两个品种较为接近。6.对液氮冷冻后、液氮冷冻前和继代(对照)的罗汉果茎尖的蛋白质进行提取,蛋白质组双向电泳,2-DE图谱分析测定,结果表明,3组的蛋白质数量有明显差异,冷冻组蛋白质点数目在1400～1500之间,未冷冻组在1900～2000之间,对照组在2200～2400之间；蛋白质覆盖率最低60%,最高为84%,而实验组组内对比中,最低76%,最高84%,显示实验重复性都较高。7.对3组实验的2-DE图谱进行差异分析显示:超低温保存产生了差异蛋白,冷冻组与对照组差异性大,共有283个蛋白差异位点,其次是未冷冻组与对照组,测得181个蛋白差异位点,冷冻组与未冷冻组差异最小,有72个蛋白差异位点。8.根据蛋白质组差异分析,从中选定21个蛋白质(A23、A08、C10、B01、C19、D60、D111、D119、D134、D124、D136、D163、E84、C21、C49、C58、D61、D128、E57、B18、D44)进行质谱鉴定鉴定结果:A23为苹果酸脱氢酶;A08为谷氨酰胺合成酶;C10为热休克蛋白70;B01为Patellin 1;C19为Ⅱ型伴侣蛋白CPN60-2,D60为26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基(片段);D111为二磷酸核酮糖羧化酶;D119为甘油醛-3-磷酸脱氢酶;D134为S-腺苷基甲硫氨酸(片段);D124为锚蛋白重复结构域蛋白2;D136为Ran结合蛋白1;D163叶绿体内的捕光叶绿素a/b结合蛋白;E84热休克蛋白17.4;C21,C49,C58,D61,D128,E57,B18和B44,这8个蛋白质功能不明。