【摘 要】
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目的:磷酸果糖激酶-2（phosphofructokinase-2,PFKFB）是糖酵解途径的一个关键酶,它共有四个亚型,分别是PFKFB1、PFKFB2、PFKFB3和PFKFB4。缺氧条件下,在脑微血管内皮细胞中PFKFB四个亚型的表达情况和它们各自发挥的作用尚不清楚。因此本研究的目的是探究缺氧条件下的人脑微血管内皮细胞（human brain microvascular endothelia
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目的:磷酸果糖激酶-2（phosphofructokinase-2,PFKFB）是糖酵解途径的一个关键酶,它共有四个亚型,分别是PFKFB1、PFKFB2、PFKFB3和PFKFB4。缺氧条件下,在脑微血管内皮细胞中PFKFB四个亚型的表达情况和它们各自发挥的作用尚不清楚。因此本研究的目的是探究缺氧条件下的人脑微血管内皮细胞（human brain microvascular endothelial cells,HBMECs）中PFKFB各亚型的表达情况以及它们各自发挥的生物学功能。研究方法:1、利用高通量RNA测序检测体外培养的HBMECs中PFKFB各亚型的表达;单细胞测序检测野生型小鼠脑微血管内皮细胞中PFKFB各亚型的表达。2、利用RT-q PCR检测缺氧不同时间后HBMECs中PFKFB各亚型的m RNA水平;Western blot检测缺氧不同时间后HBMECs中PFKFB3和PFKFB4的蛋白质水平;免疫荧光实验检测缺氧10h后HBMECs中PFKFB3和PFKFB4的表达情况;利用RT-q PCR和Western blot检测氯化钴处理后HBMECs中PFKFB3和PFKFB4的表达情况。3、应用si RNA分别在HBMECs中特异性敲降PFKFB3和PFKFB4的表达,检测细胞增殖的变化。4、利用体外血管生成实验检测在HBMECs缺氧不同时间、分别敲降PFKFB3和PFKFB4、缺氧条件下分别敲降PFKFB3和PFKFB4这三种处理后细胞体外血管生成的情况。5、利用划痕实验检测在HBMECs缺氧不同时间、分别敲降PFKFB3和PFKFB4、缺氧条件下分别敲降PFKFB3和PFKFB4这三种处理后细胞迁移的情况。结果:1、在HBMECs中PFKFB3的表达最多,PFKFB2和PFKFB4的表达相近,而PFKFB1表达最少;在野生型小鼠的脑微血管内皮细胞中,PFKFB2、PFKFB3和PFKFB4的表达相近,PFKFB1表达最少。2、缺氧能够促进HBMECs中PFKFB3和PFKFB4的表达。3、分别敲降PFKFB3和PFKFB4均不影响HBMECs增殖。4、短暂缺氧能够促进HBMECs体外血管生成,缺氧条件下分别敲降PFKFB3和PFKFB4后HBMECs体外血管生成受到抑制。5、短暂缺氧能够促进HBMECs迁移,缺氧条件下分别敲降PFKFB3和PFKFB4后HBMECs迁移受到抑制。结论:缺氧通过诱导HBMECs中PFKFB3和PFKFB4的表达,促进HBMECs体外血管生成和细胞迁移。
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