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目的:观察淫羊藿苷(Icariin, ICA)对钛颗粒(titanium particles, Ti)诱导破骨细胞活化的影响并探讨其可能的作用机理。方法:钛颗粒(titanium particles, Ti)和或核因子кB受体配体(Receptor activator ofnuclear factor кB ligand, RANKL)诱导小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞,加入不同浓度的淫羊藿苷(Icariin, ICA)进行干预。实验分为5组:单纯RAW264.7细胞,不加任何处理因素即空白对照组;Ti颗粒诱导RAW264.7细胞即Ti组;50ng/mL RANKL和50ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(macrophage-colony stimulating factor, M-CSF)诱导RAW264.7细胞即RANKL组;50ng/mL RANKL+M-CSF和Ti颗粒共同诱导RAW264.7细胞即RANKL+Ti组;50ng/mL RANKL+M-CSF和Ti颗粒共同诱导RAW264.7细胞后加入ICA进行干预,即ICA组。观察RAW264.7细胞形态学变化;CCK-8法检测不同浓度的Ti颗粒或(和) ICA对RAW264.7细胞增值活性的影响;通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定成熟破骨细胞;扫描电镜观察骨吸收陷窝检测骨吸收功能;定量RT-PCR检测肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor alpha, TNF-α)、白介素1β(Interleukin1beta, IL-1β)、组织蛋白酶K (cathepsin K, CatK)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase9, MMP-9)、抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acidphosphatase,TRAcP)、核因子кB受体活化因子(Receptor activator of nuclear factor кB,RANK)等破骨细胞活化相关基因mRNA的表达情况。结果:1.光镜下见RAW264.7细胞为直径较小的圆形单核细胞,易贴壁,增殖较快,加入Ti颗粒后,可见RAW264.7细胞吞噬Ti颗粒现象,胞体变大。CCK-8结果表明Ti颗粒在0.001、0.01、0.1mg/ml时对RAW264.7细胞的增值活性无明显影响(P>0.05),而1mg/ml对RAW264.7细胞的增殖活性有明显影响(P<0.05);ICA在1×10-7、1×10-6、1×10-5mol/L时不影响RAW264.7细胞增殖(P>0.05),而1×10-4mol/L ICA明显抑制RAW264.7细胞增殖活性(P<0.05);将0.1mg/ml Ti颗粒与ICA (1×10-7、1×10-6、1×10-5mol/L)共培养RAW264.7细胞后,与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.TRAP染色阳性破骨细胞为胞浆红色的多核细胞。诱导5天后经TRAP染色,Ti组、RANKL组、RANKL+Ti组观察到的多核破骨细胞数量(个/cm2)分别为Ti组21.0±1.43,RANKL组181.17±5.67,RANKL+Ti组232.00±5.22,与空白对照组(4.33±1.03)比较差异有统计学意义(P<0.05);RANKL+Ti组、RANKL组与Ti组之间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);加入不同浓度ICA干预后,破骨细胞数量分别为156.74±8.04(1×10-7mol/L)、104.6±6.07(1×10-6mol/L)和50.00±7.48(1×10-5mol/L),与RANKL+Ti组比较有统计学意义(P<0.05)。3.扫描电镜观察Ti组、RANKL组和RANKL+Ti组骨吸收陷窝数量(个/well)及面积(%/well)分别为(27.4±3.42,7.3±0.37%)、(140.9±6.19,27.0±1.51%)、(177.3±7.41,34.1±1.95%),与空白组(3.5±1.29,0.8±0.07)比较差异有统计学意义(P<0.05),RANKL+Ti组、RANKL组与Ti组之间两两比较差异有统计学意义(P<0.05);而ICA组的骨吸收陷窝数量和吸收面积随浓度1×10-7、1×10-6、1×10-5mol/L增高而减少,依次为(135.8±4.86,25.9±2.10)、(90.7±3.50,19.8±0.74)、(71.8±6.60,15.9±1.26),与RANKL+Ti组比较差异有统计学意义(P<0.05)。4.定量RT-PCR结果显示,TNF-α、IL-1β、MMP-9、Catk、RANK、TRAcP基因mRNA表达水平分别为:Ti组(1.75±0.10,2.15±0.18,1.90±0.11,1.91±0.14,2.24±0.29,1.99±0.14), RANKL组(1.70±0.12,2.35±0.28,30.45±5.68,15.94±1.04,2.62±0.17,29.68±4.43),RANKL+Ti组(4.07±0.39,40.00±4.31,149.87±8.40,40.14±3.28,56.89±5.65,52.50±6.35),与空白组(1.00±0.11,1.00±0.10,1.00±0.13,1.00±0.12,1.00±0.10,1.00±0.11)比较,差异有统计学意义(P<0.05);加入ICA (1×10-6mol/L)后上述基因表达水平分别为(1.90±0.15,23.01±4.18,16.40±1.15,10.42±1.67,37.02±4.30,28.04±5.11),与RANKL+Ti组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ti颗粒能上调TNF-α、IL-1β、MMP-9、Catk、RANK、TRAcP基因mRNA的表达,诱导破骨细胞的活化并增强破骨细胞性骨吸收;而ICA能下调上述各基因mRNA的表达,抑制Ti颗粒诱导的破骨细胞活化和骨吸收功能。ICA可能会成为一种治疗假体无菌性松动的新选择。