双氢青蒿素调控VEGF/VEGFR信号通路介导的抗肝细胞癌效应研究

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目的:通过研究不同剂量组双氢青蒿素对人肝癌SMMC-7721移植瘤裸鼠模型的体内抑瘤作用,以及双氢青蒿素对离体培养的SMMC-7721细胞体外抑制作用,探讨双氢青蒿素的抗肝癌作用和作用机制。  方法:体内实验:人肝癌SMMC-7721细胞离体培养,建立人肝癌SMMC-7721移植瘤裸鼠模型,分双氢青蒿素低(20mg/kg)、中(30mg/kg)、高(40mg/kg)剂量组、阳性对照组(贝伐单抗100mg/kg)和空白对照组;双氢青蒿素各组给予相应浓度双氢青蒿素灌胃,阳性对照组给予贝伐单抗溶液腹腔注射,空白对照组给予相同体积生理盐水灌胃;给药后每3d测量各组裸鼠移植瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;满28d处死各组裸鼠,剥离肿瘤称重,计算抑瘤率;收集移植瘤标本,HE染色法检测肿瘤病理改变。体外实验:配置低(20mg/kg)、中(30mg/kg)、高(40mg/kg)、极高(60mg/kg)组双氢青蒿素含药血清,取指数生长期的人肝癌SMMC-7721细胞分成双氢青蒿素低、中、高、极高组,阳性对照组(贝伐单抗10mg/L),空白对照组;药物处理后倒置显微镜下观察细胞形态变化;噻唑蓝法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测各组细胞凋亡;RT-PCR法和western-blotting法检测各组细胞VEGF、VEGFR-1的核酸和蛋白表达。  结果:体内实验:相对于空白对照组,双氢青蒿素能明显延缓肿瘤生长速度,双氢青蒿素低、中、高组的抑瘤率分别达到42%、53%、48%,中剂量组的双氢青蒿素抑瘤效果较低、高剂量组明显,HE染色各组无明显变化;体内实验:双氢青蒿素各剂量组均能抑制细胞增殖,并且呈现时间和浓度的依赖性,其中中剂量组的抑制率最高,24、48、72h的细胞抑制率分别达到36.21%、41.56%和45.88%;流式细胞仪检测结果显示,双氢青蒿素低、中、高、极高剂量组的细胞凋亡率分别为4.74%、19.73%、17.42%、16.13%,中剂量组的细胞凋亡率较其他剂量组最高;RT-PCR和western-blotting结果提示双氢青蒿素能明显降低VEGF、VEGFR-1的mRNA和蛋白表达,其中中剂量组的抑制作用优于其他剂量组。  结论:30mg/kg是双氢青蒿素的最佳作用浓度,这个浓度的双氢青蒿素能明显抑制人肝癌SMMC-7721移植瘤裸鼠模型的肿瘤生长,并且对离体培养的人肝癌SMMC-7721细胞也有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用,这种作用可能与双氢青蒿素对VEGF/VEGFR信号通路的调控有关。
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