小反刍兽疫（Peste des petits ruminants,PPR）是绵羊、山羊等小反刍动物的烈性传染性病毒病,发病率和死亡率可达90%以上。其病原体为副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒（Peste des petits ruminants virus,PPRV）。PPR是世界动物卫生组织（OIE）列出的必须报告疫病,也是我国规定的一类动物疫病。目前PPR尚无有效治疗手段,主要依靠疫苗接种进行防控,因此需要建立准确快速的抗体检测方法,评估疫苗免疫效果。H蛋白是PPRV结构蛋白中能刺激机体产生中和抗体的蛋白,具备建立ELISA抗体检测方法的潜质。蛋白质功能主要取决于空间结构,因而获得精准的蛋白质结构信息对研究蛋白质功能至关重要。了解PPRV H蛋白的具体结构有利于为新型检测技术及基因工程疫苗设计提供指导,目前副黏病毒科已有部分病毒的蛋白结构被解析出来,但小反刍兽疫病毒的H蛋白结构研究很少。本研究合成PPRV Nigeria/75/1株H蛋白基因序列,并利用酵母表达方法获得重组目的蛋白并进行纯化。对PPRV H蛋白的晶体培养条件进行了摸索。此外,以纯化后的H蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA方法,用于检测PPRV抗体,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证,同时与国外商品化试剂盒进行比对试验。获得以下研究结果:1.成功构建pGAPZα-PPRV-H重组质粒,并获得重组蛋白。对Nigeria/75/1株的H蛋白基因进行密码子优化,并加入His标签,成功构建至pGAPZα载体中。转化至SMD1168工程菌中进行毕赤酵母表达,获得重组蛋白。用梯度浓度的含咪唑溶液纯化pGAPZα-PPRV-H蛋白。经过SDS-PAGE验证,所表达目的蛋白大小正确。经过Western Blot验证,所表达目的蛋白能够和PPRV阳性血清产生特异性反应,具有良好反应原性。2.初步获得PPRV-H蛋白晶体培养条件。PPRV-H蛋白结晶的条件为1 M BIS-TRIS p H 7.5,25%w/v聚乙二醇3350;0.1 M硫氰酸钾,30%w/v聚乙二醇单甲醚2000;0.1 M HEPES p H 7.5,0.2 M硫酸锂一水化合物,25%w/v聚乙二醇3350。3.成功建立PPRV间接ELISA抗体检测方法。抗原包被浓度为5μg/m L;封闭液为1%酪蛋白,条件为37℃封闭2 h;待检血清稀释度为1:5,反应条件为37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1:3000,反应条件为37℃孵育30 min;显色液反应条件为37℃作用10 min;确定了临界值为0.320。在确定好基本条件后,对该方法进行了特异性、敏感性和重复性试验。结果表明该方法与羊痘病毒、羊蓝舌病病毒、羊布氏杆菌、羊口疮病毒、口蹄疫病毒的阳性血清均无特异反应;PPRV阳性血清在稀释至1:800时仍能检测出阳性,敏感性良好;批间和批内变异系数在8.9%以内;与ID-vet商品化检测试剂盒符合率为93.97%。