辣椒高效遗传转化体系的建立及其在NAC,CDPK,CIPK等候选基因遗传转化中的应用

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:jia343212539
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
辣椒(Capsicum annuum L)是一种重要的蔬菜和工业原料作物,遗传转化是其基因工程遗传改良和功能基因组学研究的重要基础。但是,目前辣椒的遗传转化体系还不完善,主要缺陷是:辣椒再生周期长,分化频率低,不定芽的伸长能力差,遗传转化频率低等,限制了基因工程在辣椒遗传改良上的有效应用和辣椒功能基因组学研究的进展,亟待建立高效的遗传转化体系。本研究采用L120,L63(朝天椒), L3(本地种),L5(天鹰小椒)等九种辣椒资源,对辣椒再生的芽诱导,芽伸长和生根的激素配比,培养基的选择,基因型,外植体类型进行了比较分析,建立起了辣椒再生体系,并在再生体系的基础上对辣椒遗传转化的预培养,共培养和侵染的时间,Kan筛选浓度进行了反复实验,建立了高效的遗传转化体系,通过农杆菌介导的叶盘法和Flamingo-bill外植体遗传转化法,并应用该体系对NAC1、CDPK和CIPK等候选基因的超表达和RNAi载体进行遗传转化,一方面验证该遗传转化体系应用效率,另一方面为进一步开展所选用的候选基因的功能鉴定奠定基础。试验的主要结论如下:1、离体再生体系的建立在辣椒再生过程中,不同外植体的芽诱导差别较大,其中带柄子叶>子叶>下胚轴。苗龄为12-16d的外植体最适宜再生诱导,辣椒基因型直接着影响芽诱导率。经过筛选激素配比,得出以下各阶段培养基配方:子叶芽分化培养基:MB+ 5mg/ L 6-BA+ 0.1mg/ L IAA+ 4mg/ L AgNO3+ 30g/ L蔗糖+7g/ L琼脂粉;下胚轴芽分化培养基:MB+ 3mg/ L 6-BA+ 1mg/ L IAA+ 4mg/ L AgNO3+ 30g/ L蔗糖+7g/ L琼脂粉;芽伸长培养基:MB+ 3 mg/ L 6-BA+1 mg/ L IAA+ 1.5 mg/ L GA3+ 4mg/ L AgNO3+ 30g/ L蔗糖+7g/ L琼脂粉;生根培养基1/2MB+0.2mg/L IAA+ 0.1mg/ LNAA+ 30g/ L蔗糖+7g/ L琼脂粉;6-BA+ IAA+ GA3配方的伸长效果优于ZT+ GA3的配方。GA3与ABA的相比较,GA3更利于芽的伸长。诱导芽经过18-22d左右的分化培养最适宜后期的伸长生长。2、遗传转化体系的建立与优化遗传转化过程中,不同生长阶段的选择压有区别,芽分化阶段采用75 mg/ L的Kan,芽伸长阶段,子叶和下胚轴分别用50 mg/ L和75mg/ L Kan进行选择,分化和伸长阶段均使用500mg/ L羧苄青霉素能有效抑制农杆菌的生长。生根阶段的Kan浓度为40 mg/ L,并以200 mg/ L的头孢霉素代替羧苄青霉素,有利于根的形成。预培养最佳时间3d,共培养2d。OD600=0.6的农杆菌侵染适宜时间为68min。Flamingo—bill外植体法,带柄子叶,子叶块的遗传转化率分别是6.8%,12.1%,4.3%,阳性转化率分别是33%,23.6%,21.1%。3、遗传转化体系的应用与候选基因转化植株的获得应用遗传转化体系和L120辣椒基因型对超表达载体和RNAi载体的NAC1基因以及候选基因CDPK和CIPK进行了遗传转化,其中超表达载体NAC1获得25植株,阳性转化率为24% ,PCR阳性植株6株;RNAi载体NAC1获得20植株,阳性转化率为25%, PCR阳性植株5株。转化CDPK和CIPK基因获得5株阳性植株。
其他文献
  基于内燃兰金循环(ICRC)发动机试验台架,研究了汽油与丙烷燃料的燃烧及排放特性。试验结果表明喷水能够增加缸内做功工质拓展示功图的面积,从而提高热效率。随着燃料喷射
煤炭资源是我国的主要能源。全国煤田面积约有55万平方公里,占国土面积的近6%。多年的开采,煤炭资源为国家经济建设做出巨大贡献的同时,也产生了一系列地质环境问题,给矿区人民的
  简要介绍了船用柴油机的EGR技术原理,通过对船用柴油机的研究,初步了解柴油机尾气的成分以及生成原理。本文运用AVL BOOST为基础仿真软件,通过对TBD234V6柴油机进行一维仿真
  在一台直喷汽油机上针对怠速工况通过改变喷油时刻和喷油量对微粒排放特性进行了试验研究,研究结果发现:偏浓与偏稀的混合气都会导致怠速工况微粒数量浓度的增加,微粒数量浓
  为研究CDPF催化剂配方对柴油机颗粒物净化效果的影响,搭建了台架试验系统,对不同CDPF催化剂配方作用下的柴油机颗粒排放特性进行了试验研究。结果表明:当CDPF催化剂配方中贵
  为一款两缸柴油机选配涡轮增压器,使用AVL boost软件建立柴油机模型,通过选配计算得到增压器参数,据此选取两款增压器HP50、JK48与柴油机模型进行联合运行计算.与JK48联
会议
雌激素受体(estrogen receptor,ER)是核受体的一种,包括ERα和ERβ两种,是调节与雌激素有关的基因转录的转录因子,通过与靶基因上特异性效应元件结合或通过与其他的转录因子(例如
  为研究发动机排放颗粒物在挥发和氧化过程中拉曼光谱参数与颗粒物的结构和化学组成的变化规律,在一台燃用国Ⅴ标准柴油的电控高压共轨增压中冷柴油机上进行颗粒物取样,对收
会议
地下水资源的大规模开采引发了超采降落漏斗,进而引发了地面沉降、地面塌陷、劣质水入侵、名泉断流、湿地消失、河流湖泊水库干涸、植物种群退化等生态环境问题和和抽水成本
  本文以某燃用BD20生物柴油混合燃料的重型柴油机为样机,研究其加装柴油机氧化催化转化器(DOC)和颗粒氧化催化器(POC)联合后处理系统在外特性、最大转矩转速1400r/min和标
会议