空气和水环境中病毒的富集、检测与净化

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空气、水中的一些致病病毒是疾病传播的一个重要途径,如SARS病毒、甲型肝炎病毒等。这些病毒在空气和水中的浓度极低,而且需要特定的方法检测,而大气、水的通常采样方法都很难做到对病毒的富集与检测。病毒不同于细菌、真菌等微生物,不能通过常规培养基培养观察。病毒的检测通常需借助特殊的仪器和方法,操作复杂、要求严格,其目的主要是检测某种特殊病毒是否存在及含量。对于空气和水环境中的病毒,可用膜过滤装置进行截留,用于环境净化或富集后用于检测。本课题采用孔径很小的超滤膜作为空气、水采样的介质,可以高效地富集环境中的极微量病毒,富集的病毒可用细胞培养法、PCR法等检测。主要以自然环境中容易分离得到的噬菌体为模型病毒,以双层琼脂法培养的噬菌斑为病毒存在的直观指示,通过测定空气和水环境中模型病毒经膜过滤装置过滤前后的浓度变化来评价膜装置富集病毒的效果。这种方法简易、高效、灵敏、可靠,为研制和丌发各种病毒采样富集装置或环境病毒净化装置提供了合适的测试技术平台。另外,本课题还初步研制开发了用于空气病毒净化的膜装置,并对其截留空气中微量病毒的性能进行了测试。在病毒的采样、富集与检测以及空气病毒净化方面,大肠杆菌噬菌体是一种很好的模型病毒,其制备包括从污水中分离噬菌体、纯化噬菌体及增殖制备高效价噬菌体。实验中采用了各种不同的超滤膜来截留空气、水中的大肠杆菌噬菌体和甲型肝炎减毒活疫苗,对噬菌体的检测用双层琼脂法,对甲肝疫苗的检测采用酶联免疫试剂盒的方法。实验结果表明,膜过滤法截留噬菌体并用双层琼脂法检测是一种简单可行地模拟环境病毒富集与检测的方法。超滤膜的截留率可达到100%,将病毒富集后用双层琼脂法检测,检测限约10PFU/ml。以此方法测试空气病毒净化器的性能表明,初步研制的膜法空气病毒净化装置能够完全去除空气中的微量病毒,有望应用在医院传染病房、生物安全实验室的空气循环系统。
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