目的：以肺腺癌患者区域转移淋巴结作为标本来源,拟构建可用于抗体筛选的人源化肺腺癌噬菌体单链抗体基因文库。方法：以肺腺癌患者区域转移淋巴结为标本,采用RT-PCR方法反转录总RNA得至cDNA文库；扩增从中获得全套的可变区基因片段(VH和VL基因)；利用SOE-PCR技术随机拼接VH和VL基因制备单链抗体可变区基因片段(single chain fragment variable. ScFv)高效转化克隆到噬菌体表达载体中的ScFv,表达扩增于大肠杆菌,得到针对肺腺癌细胞的初级噬菌体单链抗体库；PCR鉴定ScFv片段阳性插入率；2.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆双酶切产物；BstN I酶鉴定其多样性。结果：以人源化肺腺癌区域转移淋巴结提取的总RNA,经1%的琼脂糖凝胶电泳后在UV下可见清晰的5S、18S、28S三条带；VH基因片段大小约450bp, Vκ序列和Vλ基因片段大小约430bp；组装后的ScFv(VH-K)、 ScFv(VH-X)基因大小约750bp; VH-κ库连接转化阳性率92%(11/12),VH-L库连接转化阳性率83%(10/12)；VH-κ库的相对库容为1.16×106PFU/ng,绝对库容为2.56×107PFU/ml; VH-λ库的相对库容7.2x 10。PFU/ng,绝对库容1.48×107PFU/ml, BstN I酶鉴定其多样性良好。结论：成功的构建了人源化肺腺癌相关噬菌体单链抗体基因文库,为进一步筛选具有肺腺癌细胞特异性的人源化噬菌体单链抗体奠定了实验基础。