大黄素联合AZT对白血病KG-1a干细胞的增殖及BCL-2、NF-κB、TGF-β的影响

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目的:探讨大黄素(Emodin, EM)和AZT联合应用对浓集白血病干细胞(Concentration of leukemia stem cells, CLSC)的KG-1 a细胞增殖和凋亡的影响,并探索BCL-2、NF-κB、TGF-β在其中的作用。方法:应用5-FU富集KG-1a细胞中CD34+CD38干细胞亚群的方法收集白血病干细胞;流式细胞仪检测富集前及富集后CD34+CD38-细胞亚群含量;MTT检测大黄素和AZT单用及联合应用对CLSC生长增殖的影响;流式细胞仪检测单药大黄素、AZT及两药联合应用对CLSC凋亡的影响;RT-PCR (Reverse transcription-PCR)及Western Blot分别检测NF-κB、BCL-2、TGF-β mRNA和蛋白的表达变化。结果:1.单药大黄素、AZT及两药联用均能抑制CLSC增殖,具有一定的时间依赖性和浓度依赖性,与对照组相比差异明显(p<0.01)。大黄素作用于细胞72h的半数抑制浓度(IC50)为(244.1±0.84)μmol/L.2.大黄素和AZT联合作用细胞72h后,细胞增殖抑制率明显高于大黄素和AZT单药组,两药物联用具有协同抑制效应(CI<1)。3.单药大黄素(20 umol/L)联合AZT (2000μmol/L、4000μmol/L)作用于细胞72h凋亡率分别为(30.35±0.4)%、(39.35±0.43)%,与对照组和各单药组相比凋亡率都明显增高,差异有统计学意义(p<0.05)。4.NF-KB、BCL-2、TGF-β mRNA及蛋白表达在联合组比在各单药组表达量下降,具有统计学差异(p<0.05)。结论:大黄素联合AZT具有协同抑制CLSC增殖和促进凋亡的作用,其机制可能与下调BCL-2、NF-κB、TGF-β表达有关。
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