【摘 要】
：
由白假丝酵母等病原真菌引起的艾滋病等免疫机能受损病人死亡的增加、现有抗真菌药物对宿主细胞的潜在毒性及耐药病原真菌的增多,使得对高效低毒的新型抗真菌药物的研究具有重要意义。嗜铬粒蛋白A是多种生物活性多肽的前体,其N端衍生多肽CGA-N46是一种短且具较高抗白假丝酵母活性的肽段,有望研发成为新型小分子肽类抗真菌药物。本研究以“SD序列+起始密码子+信号肽序列+ CGA-N46基因编码序列+终止密码子”
论文部分内容阅读
由白假丝酵母等病原真菌引起的艾滋病等免疫机能受损病人死亡的增加、现有抗真菌药物对宿主细胞的潜在毒性及耐药病原真菌的增多,使得对高效低毒的新型抗真菌药物的研究具有重要意义。嗜铬粒蛋白A是多种生物活性多肽的前体,其N端衍生多肽CGA-N46是一种短且具较高抗白假丝酵母活性的肽段,有望研发成为新型小分子肽类抗真菌药物。本研究以“SD序列+起始密码子+信号肽序列+ CGA-N46基因编码序列+终止密码子”为外源片段,利用一对同尾酶NheⅠ和SpeⅠ,以pMD18-T为克隆载体,构建了单、双和三拷贝CGA-N46基因的重组T载体pT-N46-KpnⅠ、pT-2N46和pT-3N46;将不同拷贝数CGA-N46基因亚克隆至携带SacB启动子和淀粉酶终止子序列的表达载体pSBPTQ上,构建了单、双和三顺反子重组表达载体p-N46、p-2N46和p-3N46;利用感受态转化法转化蛋白酶缺陷型枯草芽孢杆菌DB1342,获得枯草芽孢杆菌工程菌DB1342（p-N46）、DB1342（p-2N46）和DB1342（p-3N46） ,并进行表达研究。SDS-PAGE电泳结果可知,在蔗糖诱导下,单、双顺反子表达系统表达量较低,几乎看不到目的蛋白表达,而三顺反子表达系统目的蛋白表达量明显提高,并以可溶性单体被分泌到培养基中。为进一步提高三顺反子表达系统目的蛋白表达量,本研究对表达条件进行了优化。研究1%的可溶性淀粉、糊精、麦芽糖、乳糖、甘油、葡萄糖等碳源对CGA-N46表达量的影响,发现1%糊精使CGA-N46表达量明显提高;研究2%的蛋白胨、酪蛋白水解物（casein）、（NH4）2SO4、2%蛋白胨+2%casein、2%casein+2%（NH4）2SO4、2%蛋白胨+2%（NH4）2SO4、2%蛋白胨+2%casein+2%（NH4）2SO4等氮源对CGA-N46表达量的影响,发现氮源为2%蛋白胨+2%casein时,CGA-N46表达量最高;研究培养基初始pH值和诱导时间对CGA-N46表达量的影响,发现初始pH为7.5、蔗糖诱导56h,目的蛋白表达量最高。采用保湿培养法和琼脂扩散法研究CGA-N46对白假丝酵母生长的抑制作用,结果表明,重组CGA-N46可明显抑制白假丝酵母的生长,抑菌圈直径达到20mm。本论文研究结果为将CGA-N46开发成抗真菌药物奠定了基础。
其他文献
对革命历史、人物事迹、留存遗址进行简要梳理以展现蚌埠红色资源；从教育者施教及受教育者研学两方面，分析蚌埠红色资源融入本地高校思想政治教育优势；从盘活红色资源、打造红色环境，强化思政抓手、夯实理论阵地，注重体悟认知、拓展红色实践，优化顶层设计、完善制度体系四个维度，提出蚌埠红色资源增强思想政治教育效果的可行路径。
小学生正处于道德修养发展和性格塑造的关键期,对新事物拥有很强的求知欲,但不具备成熟的学习能力,主要通过对周围人行为言语的模仿来获取新知识、新技能。因此教职工的言谈举止都会对其产生重大影响,一定要确保教学课堂的科学性和课堂教学的合理性,以确保小学生可以在课堂教学很短时间内学得更好的理论知识,在此基础上提升综合素养。本文联系教学实际,详细分析小学品德课上有效化教学活动的相关策略。
反义寡核苷酸是重要的分子生物学研究工具和潜在的治疗药物。多种反义寡核苷酸为聚阴离子化合物,难以跨越细胞膜。在反义寡核苷酸上共价缀合肽提供了一个解决这一问题的途径。近二十年来,人们对肽缀合反义寡核苷酸的合成方法进行了诸多有益的探索,由此发展了很多肽与寡核苷酸缀合的方法,但至今还没有一种合成方法适用于所有肽缀合反义寡核苷酸的合成。本文针对肽缀合反义寡核苷酸的合成这一主题,发展了一种液相片段缀合方法,成
有限元方法是求解工程力学问题的重要数值方法之一,它是通过将微分方程求解区域剖分,利用场函数分片多项式逼近模式将连续的、无穷维空间问题化为离散的有限维空间问题来实现求解的.传统有限元理论分析中的基本理论都是建立在正则性假设或拟一致性条件的基础上,然而在运用有限元方法求解某些复杂问题时,正则性条件和拟一致性条件不一定满足.本文在各向异性网格下,即在无正则性条件或拟一致条件下,对双三次Hermite矩形
以一座山区大跨度铁路悬索桥为工程背景，针对陡峭地形条件、复杂峡谷风特性、近场强震区等建设条件，确定采用适应性强的钢桁梁悬索桥，介绍了桥梁结构设计方案。通过车桥耦合动力分析和弦测值分析提出对车体加速度和轨道30 m弦测值分级管理的刚度标准。根据峡谷风实测数据，经抗风性能风洞试验和风-车-桥耦合振动分析，大桥颤振、涡振、驰振等抗风性能均满足要求，桥面平均风速达到25 m/s时桥上行车安全性及旅客乘坐舒
济宁市地跨黄淮两大流域，水是制约经济社会可持续发展的重要因素。本文通过对济宁市水生态现状中存在的时空分布不均、水生态环境问题突出、极端气候造成旱涝灾害威胁加大、现代水治理体系不完善等问题进行分析探讨，据此从河湖生态保护与修复、水土保持综合治理、地下水超采区治理、农村水系综合整治、农村生活污水治理等几个方面提出相应的措施建议，可为济宁市水生态保护和修复工作提供参考。
寡肽类化合物一般具有较强的生物活性,多数可作为药物或药物前体。DNA是生物遗传信息的载体,它的分子结构和特性与温度、酸碱度、溶液的盐浓度等环境因素密切相关。研究寡肽与DNA的相互作用有助于从分子水平上了解药物的作用机理,可为设计临床上更为有效的药物提供理论依据。因此,DNA与寡肽相互作用的研究在化学、生物学和医学领域具有重要的理论意义和应用价值。选取多肽固相合成方法,以Wang树脂为固相载体、Fm
分数阶微分方程是含有未知函数的分数阶导数的方程.分数阶微分方程是对传统的整数阶微分方程的推广.分数阶微分算子能非常有效的描述各种各样物质的性质,在许多领域发挥着越来越重要的作用,刻画自然现象的分数阶微分方程也大量涌现,引发了人们研究分数阶微分方程的热潮.关于分数阶微分方程的求解,有时可以沿用传统方法,例如Laplace变换法.不过众所周知,在应用Laplace逆变换求解原函数时,存在一定困难,对于
工业区域在经济发展的同时会对周边水环境带来大量的污染，水环境污染来源分析是一个包含社会、经济、水环境的复杂的系统问题，而系统动力学模型具有多回路、非线性等特点，可以克服当前研究缺乏全局性和线性单向建模的问题。以工业聚集区——常州市经济开发区为例，构建系统动力学模型，考虑不同发展规划和污染防控措施设计4种发展情景，模拟预测未来不同污染物的排放量，并结合一维水质模型计算出口断面的CODMn、氨氮、TN
根据赤峰市水环境承载力实际情况选取19个生态、经济和社会评价指标，基于驱动力-压力-状态-管理模型（Driving-Pressure-State-Manage）建立赤峰市水环境承载力评价指标体系，对2010-2019年赤峰市水环境承载力动态进行综合评价，采用spearman的秩相关系数评价赤峰市水环境承载力趋势，并采用向量模法评价驱动力-压力-状态-管理子系统对水环境承载力的影响状况。结果表明，2