GnRH Ⅱ在子宫内膜异位症的表达及对离体间质细胞凋亡影响的研究

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目的:研究GnRHⅡ蛋白在子宫内膜异位症中的表达及其对离体培养的子宫内膜间质细胞凋亡的影响。方法:选自2007年8月至2008年4月在中南大学湘雅二医院住院手术及病理证实,确诊为子宫内膜异位症巧克力囊肿,取异位和在位子宫内膜各30例作为实验组,另选同期非子宫内膜异位症患者的正常子宫内膜组织40例作为对照组。采用免疫组化SP法检测GnRHⅡ蛋白在异位内膜、在位内膜及正常内膜组织中的表达情况,比较分析其表达差异性。另取30例内异症异位及在位内膜组织进行间质细胞的分离、培养、鉴定,并以不同浓度的GnRHⅡ(0、10-10M、10-8M、10-6M)作用于这些离体培养的子宫内膜间质细胞,采用Hoechst染色和流式细胞术检测离体培养的子宫内膜间质细胞的细胞凋亡的发生情况。结果:(1)GnRHⅡ蛋白阳性表达定位于在位、异位及正常子宫内膜腺体及间质细胞的细胞浆,呈浅黄色、黄色、棕黄色或棕褐色。(2)GnRHⅡ蛋白在EMs异位和在位内膜及对照组正常内膜的表达依次增强,两两比较差异有显著性(P<0.05)。(3)GnRHⅡ在EMs患者的在位子宫内膜和异位内膜中的表达,不管是在增生期还是在分泌期都低于非EMs的子宫内膜(P<0.05),在正常内膜中的表达分泌期强于增生期,差异有显著性(P<0.05);而EMs异位内膜和在位内膜的分泌期和增生期表达无差异(P>0.05)。(4)离体培养情况下,对数生长期的子宫内膜间质细胞给予不同浓度的GnRHⅡ(0、10-10M、10-8M、10-6M)干预后,采用Hoechst染色对不同处理组细胞进行了细胞凋亡形态学的分析。结果显示:不同浓度的GnRHⅡ对离体培养的在位和异位子宫内膜间质细胞可诱导凋亡发生,表现为核碎裂,核溶解,核固缩或凋亡小体。其凋亡率(%)分别为:(2.58±0.73,4.90±0.41),(8.72±1.59,12.30±2.13),(19.90±2.37,29.40±4.05),(36.10±2.36,52.30±5.42),两两比较,差异有显著性(P<0.05),提示:不同浓度的GnRHⅡ对离体培养的异位内膜间质细胞的凋亡率明显高于在位(P<0.05),且呈剂量依赖性。流式细胞术检测结果显示:不同浓度的GnRHⅡ对离体培养的在位和异位子宫内膜间质细胞可诱导凋亡发生,其凋亡率(%)分别为:(2.31±0.26,5.40±0.39),(10.20±2:1.29,14.50±2.17),(25.70±3.22,36.20±4.64),(59.70±6.63,72.30±8.12),两两比较,差异有显著性(P<0.05),与Hoechst染色检测的凋亡率一致。提示:不同浓度的GnRHⅡ对离体培养的异位内膜间质细胞的促凋亡作用明显强于在位内膜间质细胞(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:(1)内源性的GnRHⅡ蛋白的低表达可能与内异症的发生发展有关。(2)GnRHⅡ蛋白在正常内膜中的表达与月经周期有关,而在EMs中无差异。(3)外源性的GnRHⅡ可能直接通过促进离体培养的EMs间质细胞的细胞凋亡而达到治疗内异症的目的,为内异症的新药开发提供实验和理论依据。
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