【摘 要】
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猪轮状病毒(Porcine Rotavirus)属于呼肠孤病毒科轮状病毒属。猪轮状病毒是引起仔猪病毒性腹泻的主要病原微生物之一,在世界多国广泛流行。猪轮状病毒对仔猪较易感,1-4周龄仔
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猪轮状病毒(Porcine Rotavirus)属于呼肠孤病毒科轮状病毒属。猪轮状病毒是引起仔猪病毒性腹泻的主要病原微生物之一,在世界多国广泛流行。猪轮状病毒对仔猪较易感,1-4周龄仔猪感染该病死亡率接近20%。仔猪感染轮状病毒表现为严重腹泻,易导致其他病原继发感染而死亡。本研究通过分析比对猪轮状病毒基因组特征,通过RT-PCR扩增,获得猪轮状病毒福建株(RV-FJ2014-01株)VP6基因全长,并对其进行了生物学信息学分析。结果表明,猪轮状病毒福建株(RV-FJ2014-01株)VP6基因全长为1 194 bp,编码有完整的ORF阅读框,所编码的氨基酸长度为397 aa。猪轮状病毒福建株(RV-FJ2014-01株)VP6基因和 pig/China/NMTL/2008/G9P 株(GenBank 号 JF781162)核苷酸同源性最高,同源性为97.7%。其和TGE13-77株(人源)(GenBank号LC000537)核苷酸同源性最低,同源性为90.3%。其和大熊猫轮状病毒分离株CH-1株(GenBank号GU188283)核苷酸同源性为90.5%。实时荧光定量PCR技术能够有效解决常规普通PCR的弊端,已被广泛应用于多种病原微生物的检测。基于TaqMan水解探针的实时荧光定量PCR技术特异性更强,自动化程度高,可用于猪轮状病毒的快速诊断。本研究基于猪轮状病毒VP6基因特征,设计特异性的荧光定量引物和探针,建立了基于TaqMan探针的实时荧光定量RT-PCR检测猪轮状病毒的方法,建立的方法敏感性高、特异性强,扩增相关系统为0.999,其组内和组间变异系数分别为0.25%～1.26%和0.31%～1.49%。本研究通过明确猪轮状病毒福建株VP6基因的特征和建立基于TaqMan水解探针的实时荧光定量PCR方法,为建立猪群感染轮状病毒的快速诊断方法、开展猪轮状病毒的流行病学调查,丰富猪轮状病毒的基因数据库信息提供的有益的借鉴和参考。
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