HCC是世界第五位常见肿瘤。中国是世界上发病率最高的国家，全球45%的HCC患者在中国。肝癌的病因及确切分子机制尚不完全清楚，目前认为其发展是多因素、多步骤的复杂过程，受环境和遗传的双重影响。流行病学及实验研究资料表明，HBV和HCV感染、黄曲霉素、饮水污染、酒精、肝硬化、口服避孕药、亚硝胺类物质、微量元素等都与HCC的发病有关。在中国HBV感染是HCC发病的主要因素。HBV是一种单链病毒，它可以将自身基因整合到宿主基因组中。HBV通过将自身DNA整合到肝细胞基因组，激活肝细胞中的原癌基因和癌变相关的细胞信号通路。在HCC中激活的主要细胞信号转导通路包括NF-κB，PI3K/Akt，MAPK和Wnt/β-catenin。这些通路调节着HCC的增殖、侵袭、血管生成和化学抗性。尽管近几十年来科学技术的发展和对肝癌高危人群的早期检测，但是肝癌患者的生存状况任然没有取得改善。主要归因于肝癌患者表现出临床症状时多以处于病变晚期，同时治疗方法的选择受到肿瘤大小，是否转移，肝功能等条件的限制。即便是早期肝癌得到成功的手术治疗，由于肿瘤早期即发生肝内血管转移，术后5年的肿瘤复发率高达70%。肝癌的高发病率，高侵袭性，高复发率对人类健康造成严重威胁。明确肝癌的发病机制，寻找一个有效的治疗靶点，对延长肝癌患者生命，改善患者生存质量至关重要。AEG-1(Astrocyteelevatedgene-1)是近年来发现的一个癌基因，最早是在HIV感染或TNF-α处理过的PHFA(primaryhumanfetalastrocytes)中克隆发现的。前人已经通过免疫组化的方法证明AEG-1广泛表达于多种肿瘤组织，包括肝细胞癌，乳腺癌，前列腺癌，胃癌，肾癌，结直肠癌，非小细胞性肺癌，食管鳞状细胞癌，黑色素瘤，多形性胶质瘤等，其中肝细胞癌组织中，强阳性表达率高达93.58%。AEG-1基因的异位表达和siRNA抑制研究表明，AEG-1在肿瘤的形成，增殖，侵袭，转移，血管生成，化学抗性等过程中发挥着重要作用。AEG-1是Ha-ras的一个下游基因，Ha-ras通过激活PI3K/Akt/GSK3β通路引起c-Myc与AEG-1结合，增强AEG-1转录。Ha-ras诱导PI3K的激活，在细胞膜表面生成PIP3，然后以PIP3为第二信使激活下游蛋白AKT。PIP3通过与具有PH结构的AKT和PKD1结合，促使PDK1磷酸化AKT的Thr308和Ser473残基，激活AKT。活化的AKT通过磷酸化作用激活GSK3β。GSK3β是C-myc的负性调控因子，GSK3β磷酸化后丧失其活性从而引起C-myc的表达增加。AEG-1启动子结构中有两个E-box，C-myc与E-box结合激活AEG-1转录。LY294002是PI3K细胞信号转导通路的特异性阻断剂，LY294002可以阻断THR（THVcellscontainingastableoverexpressionofHa-ras）细胞的AEG-1表达。AEG-1的表达不仅受到PI3K/AKT和c-Myc的诱导，而且其自身也激活PI3K/AKT，并且诱导c-Myc的表达，因此在肿瘤形成过程中构成一个恶性循环。AEG-1除了与PI3K/Akt相互作用外，还激活NF-κB，Wnt/β-catenin和MAKP通路，共同调节肿瘤的增殖，侵袭，血管生成和化学抗性。本实验，研究了PI3K抑制剂LY294002体外阻断HCC细胞中AEG-1表达后，对HCC细胞的细胞活性、凋亡和侵袭性的作用。试验中采用了RT-PCR、Westernblot、MTT、免疫细胞化学、Millicell等方法对实验效果进行检测。数据显示HCC细胞株中AEG-1在mRNA和蛋白水平上均高于正常肝细胞株。LY294002显著抑制了HCC细胞的细胞活性，并加快了HCC细胞的凋亡，同时Millicell实验还检测到LY294002明显降低了HCC细胞的迁移性和侵袭性。在分子水平上，LY294002抑制了AEG-1、cyclinD1、CDK4、VEGF和Bcl2的表达，降低了AKT和GSK3β的磷酸化水平，增强了Bax和c-Myc的表达。以上数据表明LY294002抑制AEG-1表达可有效控制HCC。尽管以上体外实验的结果对于治疗HCC具有重要意义，但这只是我们研究的开始。今后我们还会做更多的实验，以实现AEG-1小分子抑制剂的临床应用。在进一步研究中，我们将检测AEG-1抑制剂LY294002在裸鼠等HCC活体模型中的作用。我们还会进一步探索AEG-1在PI3K-AEG-1细胞信号通路外的其他细胞信号转导通路中的作用机制。总之，本研究发现AEG-1是LY294002在肝癌细胞中的有效作用靶点，他将对HCC的治疗提供新的依据。