论文部分内容阅读
目的:缺氧环境与化疗抵抗的发生和发展有密切的关系,HIF-1 (乏氧诱导因子1)是细胞在乏氧状态下被激活的重要的转录因子。本实验旨在研究在非小细胞肺癌细胞系中,乏氧诱导因子-1α在新一代化疗药物培美曲塞二钠化疗抵抗中的作用机制。方法:以人非小细胞肺癌细胞系A549细胞株为研究对象,通过模拟常氧和乏氧环境,MTT检测培美曲塞的药物敏感性, Westernblot检测siRNA干扰沉默HIF-1表达后的蛋白表达,再利用MTT检测转染后细胞对于培美曲塞的药物敏感性,并通过转染和流式细胞仪检测乏氧诱导因子-1α在细胞周期重新分布中的作用。结果:1.MTT实验表明乏氧培养后加入培美曲塞细胞的抑制率曲线较常氧加药曲线明显右移,常氧培美曲塞组和乏氧培美曲塞组组的IC50有显著性差异。2.Westernblot检测表明乏氧条件下HIF-1α蛋白表达显著增高,HIF-1α/siRNA可显著降低乏氧条件下的HIF-1α蛋白的表达。3.利用siRNA转染后的A549细胞进行MTT试验,结果显示转染后培美曲塞在乏氧条件下对A549细胞的增殖抑制率明显增加;乏氧和常氧下药物对A549细胞的抑制率没有明显差别。4.细胞周期检测显示乏氧环境可以增加G0/G1期细胞阻滞,沉默HIF-1α可以细胞G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,siRNA转染后加入培美曲塞,S期分布明显增加。结论:表明由于缺氧刺激产生的HIF-1α,可能为培美曲塞化疗抵抗中的重要因数,可以导致非小细胞肺癌细胞周期停滞在G0/G1期,从而引起细胞对于作用于S期的培美曲塞的化疗抵抗。去除缺氧环境或通过siRNA转染沉默HIF-1α可能为提高培美曲塞在人类肺癌及其他肿瘤的治疗有效率提供了新途径,若同时联合培美曲塞应用可能提供了一种新的治疗模式。