治疗性抗体(Therapeutic Antibodies)是一种治疗性蛋白,常通过阻断细胞信号通路,诱导抗体、补体介导的细胞毒性作用,以及细胞凋亡等方式达到治疗效果,具有特异性、高效性的特点。但是,治疗性抗体也存在两个主要问题:生产成本高,可能具有免疫原性。电脉冲介导的基因导入技术(Electric Pulses-Mediated Gene Transfer,简称电转染),则是一种安全性好,转染效率高的非病毒载体基因治疗手段。且由于骨骼肌作为电转染的目标组织,具有能够稳定表达目的蛋白的能力,其中丰富的血管也利于所表达的蛋白进入血液循环。本课题诣在通过电转染法,将表达治疗性蛋白的基因导入小鼠骨骼肌,从而达到在体内表达治疗性抗体的目的,以减少治疗性抗体的免疫原性,同时降低治疗性抗体的治疗成本。本研究选取了用于治疗艾滋病的HIV中和抗体5A8作为模型,构建了分别编码5A8重链和轻链的质粒DNA,pVAX1-5A8-H和pVAX1-5A8-L,在体外通过Lipofectamine 2000转染HEK293T细胞,在上清中成功检测到了完整5A8单克隆抗体的表达和分泌,并通过纯化,验证了抗体的结构和活性。在动物实验中,我们首先利用质粒表达的Luciferase和鸡卵清白蛋白(Ovalbumin,OVA)为模型,筛选出高转染效率的电脉冲条件(电压=60V,脉宽=50ms,频率=1Hz,转染次数=12次),并考察了不同电场强度对体内电转染表达治疗性蛋白所引起免疫反应的影响。在此基础上,用筛选得到的电脉冲参数在Balb/c小鼠骨骼肌内导入pVAX1-5A8-H和pVAX1-5A8-L质粒,结果显示:小鼠血清中5A8抗体的浓度在电转染后21天左右达到最高水平(0.852±0.283μg/ml),抗体在血清中的存留时间>90天。同时,多次电转染可以维持血清中的抗体浓度水平。此外,我们还在Balb/c小鼠骨骼肌中电转染不同剂量的质粒DNA,发现血清中抗体的水平与DNA剂量成正相关。最后,我们在免疫缺陷SCID小鼠骨骼肌电转染表达5A8单抗,与Balb/c小鼠进行对比,并同时检测经过电转染后两种小鼠血清里的抗抗体含量,确定并没有显著的免疫反应产生。这一系列研究说明,通过电转染法在骨骼肌内表达治疗性抗体的方法是安全可行的,有可能作为一种治疗性抗体治疗的新途径,有重要的应用前景。