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背景及目的
新生儿败血症是新生儿期常见的感染性疾病，发病率及死亡率较高。目前，血培养是诊断新生儿败血症的金标准，然而，血培养阳性率较低。16SrRNA基因是细菌染色体上编码rRNA相对应的脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid,DNA）序列，存在于所有细菌染色体基因中，分为保守区和可变区。通过在基因保守区设计细菌通用引物进行聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction，PCR）可以检测细菌脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid，DNA），PCR技术有望成为新生儿败血症病原学诊断的新方法。本研究通过与血培养及临床诊断的非特异性指标比较，探讨细菌16SrRNA基因PCR检测技术在新生儿败血症诊断的应用价值。
研究方法
对汕头大学医学院第一附属医院2016年12月至2018年1月疑诊败血症的102例新生儿，于入院24小时内，未使用抗生素条件下，收集一份血液标本进行血培养，一份血液标本提取DNA，进行PCR检测。将细菌DNA进行成倍稀释，浓度为106CFU/ml-100CFU/ml，同时将巨细胞病毒（Cytomegalovirus，CMV）和乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）提取DNA进行PCR扩增，进一步验证PCR的敏感性及特异性。102例新生儿入院后完善血常规、C反应蛋白（C-reactiveprotein，CRP）及外周血涂片等非特异性指标检查，其中根据2003年新生儿败血症诊断标准，确诊及临床诊断败血症的新生儿有46例。以相同的方法采集10例同时选取10例同期因非感染性疾病住院的新生儿血液标本作为阴性对照。结果采用SPSS23.0统计软件进行分析。
结果
1.102例新生儿经临床诊断及实验室确诊败血症有46例，其中血培养阳性15例，阳性率32.61%（15/46），16SrRNA基因PCR检测阳性42例，阳性率91.30%（42/46），明显高于血培养，差异具有显著统计学意义（P＜0.001）。所有PCR阳性结果经琼脂糖凝胶电泳成像得到1500bp的单一条带，且其扩增下限浓度为101CFU/ml，而CMV、HBV扩增后未见条带，PCR检测结果为阴性。PCR检测灵敏度为91.30%（42/46），特异度为96.43%（54/56）。假阳性率3.57%（2/56），假阴性率8.70%（4/46）。阳性预测值95.45%（42/44），阴性预测值93.10%（54/58）。正确度94.12%（96/102），约登指数88.73%（91.3%+96.43%-1）。
2.42例PCR阳性患儿，革兰阳性菌（Gram-positivebacteria，G+）23例（54.7%），革兰阴性菌（Gram-negativebacteria，G-）19例（45.3%）。G+菌前三位病原菌分别为凝固酶阴性葡萄球菌（Coagulasenegativestaphylococcus，CNS）10例（43.5%），B组溶血性链球菌（GroupBstreptococcus，GBS）5例（21.7%），金黄色葡萄球菌3例（9.5%）。G-菌前三位病原菌为大肠埃希菌7例（36.8%），肺炎克雷伯菌5例（26.3%），阴沟肠杆菌2例（10.5%）。早发型败血症（Early-onsetsepsis，EOS）28例，常见的病原菌是大肠埃希菌5例（17.9%），GBS4例（14.3%），CNS3例（10.7%）。晚发型败血症（Late-onsetsepsis，LOS）18例，常见的病原菌是CNS7例（38.9%），金黄色葡萄球菌3例（16.7%），肺炎克雷伯菌3例（16.7%）。15例血培养阳性的血液标本，其中8例血培养结果与PCR检测的病原菌结果完全一致；2例血培养结果与PCR检测的病原学结果不完全一致，PCR检测两种致病菌，其中一种与血培养结果相同；5例血培养结果PCR检测结果完全不一致。
3.两项及以上非特异性指标异常在诊断新生儿败血症的灵敏度82.61%（42/46），特异度100%（56/56），约登指数61.82%（82.61%+100%-1），正确度92.16%（94/102）。与16SrRNA基因PCR检测相比，其特异性高达100%，二者的灵敏度及特异度差异无统计学意义（P＞0.05）。
结论
1.16SrRNA基因PCR检测技术敏感性高，检测下限为101CFU/ml，在低水平菌血症的情况下也能检测到细菌DNA，且不能扩增病毒DNA，具有特异性。
2.针对新生儿败血症的病原学检测，PCR检测技术阳性率高于血培养，且具有较高的灵敏度及特异度，两者的病原菌检测结果一致性较好。
3.16SrRNA基因PCR检测与两项及以上非特异性指标异常在新生儿败血症诊断的灵敏度及特异度相近，但后者与无法进行病原学诊断，故16SrRNA基因PCR检测技术在诊新生儿败血症诊断具有重要的临床应用价值。
新生儿败血症是新生儿期常见的感染性疾病，发病率及死亡率较高。目前，血培养是诊断新生儿败血症的金标准，然而，血培养阳性率较低。16SrRNA基因是细菌染色体上编码rRNA相对应的脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid,DNA）序列，存在于所有细菌染色体基因中，分为保守区和可变区。通过在基因保守区设计细菌通用引物进行聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction，PCR）可以检测细菌脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid，DNA），PCR技术有望成为新生儿败血症病原学诊断的新方法。本研究通过与血培养及临床诊断的非特异性指标比较，探讨细菌16SrRNA基因PCR检测技术在新生儿败血症诊断的应用价值。
研究方法
对汕头大学医学院第一附属医院2016年12月至2018年1月疑诊败血症的102例新生儿，于入院24小时内，未使用抗生素条件下，收集一份血液标本进行血培养，一份血液标本提取DNA，进行PCR检测。将细菌DNA进行成倍稀释，浓度为106CFU/ml-100CFU/ml，同时将巨细胞病毒（Cytomegalovirus，CMV）和乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）提取DNA进行PCR扩增，进一步验证PCR的敏感性及特异性。102例新生儿入院后完善血常规、C反应蛋白（C-reactiveprotein，CRP）及外周血涂片等非特异性指标检查，其中根据2003年新生儿败血症诊断标准，确诊及临床诊断败血症的新生儿有46例。以相同的方法采集10例同时选取10例同期因非感染性疾病住院的新生儿血液标本作为阴性对照。结果采用SPSS23.0统计软件进行分析。
结果
1.102例新生儿经临床诊断及实验室确诊败血症有46例，其中血培养阳性15例，阳性率32.61%（15/46），16SrRNA基因PCR检测阳性42例，阳性率91.30%（42/46），明显高于血培养，差异具有显著统计学意义（P＜0.001）。所有PCR阳性结果经琼脂糖凝胶电泳成像得到1500bp的单一条带，且其扩增下限浓度为101CFU/ml，而CMV、HBV扩增后未见条带，PCR检测结果为阴性。PCR检测灵敏度为91.30%（42/46），特异度为96.43%（54/56）。假阳性率3.57%（2/56），假阴性率8.70%（4/46）。阳性预测值95.45%（42/44），阴性预测值93.10%（54/58）。正确度94.12%（96/102），约登指数88.73%（91.3%+96.43%-1）。
2.42例PCR阳性患儿，革兰阳性菌（Gram-positivebacteria，G+）23例（54.7%），革兰阴性菌（Gram-negativebacteria，G-）19例（45.3%）。G+菌前三位病原菌分别为凝固酶阴性葡萄球菌（Coagulasenegativestaphylococcus，CNS）10例（43.5%），B组溶血性链球菌（GroupBstreptococcus，GBS）5例（21.7%），金黄色葡萄球菌3例（9.5%）。G-菌前三位病原菌为大肠埃希菌7例（36.8%），肺炎克雷伯菌5例（26.3%），阴沟肠杆菌2例（10.5%）。早发型败血症（Early-onsetsepsis，EOS）28例，常见的病原菌是大肠埃希菌5例（17.9%），GBS4例（14.3%），CNS3例（10.7%）。晚发型败血症（Late-onsetsepsis，LOS）18例，常见的病原菌是CNS7例（38.9%），金黄色葡萄球菌3例（16.7%），肺炎克雷伯菌3例（16.7%）。15例血培养阳性的血液标本，其中8例血培养结果与PCR检测的病原菌结果完全一致；2例血培养结果与PCR检测的病原学结果不完全一致，PCR检测两种致病菌，其中一种与血培养结果相同；5例血培养结果PCR检测结果完全不一致。
3.两项及以上非特异性指标异常在诊断新生儿败血症的灵敏度82.61%（42/46），特异度100%（56/56），约登指数61.82%（82.61%+100%-1），正确度92.16%（94/102）。与16SrRNA基因PCR检测相比，其特异性高达100%，二者的灵敏度及特异度差异无统计学意义（P＞0.05）。
结论
1.16SrRNA基因PCR检测技术敏感性高，检测下限为101CFU/ml，在低水平菌血症的情况下也能检测到细菌DNA，且不能扩增病毒DNA，具有特异性。
2.针对新生儿败血症的病原学检测，PCR检测技术阳性率高于血培养，且具有较高的灵敏度及特异度，两者的病原菌检测结果一致性较好。
3.16SrRNA基因PCR检测与两项及以上非特异性指标异常在新生儿败血症诊断的灵敏度及特异度相近，但后者与无法进行病原学诊断，故16SrRNA基因PCR检测技术在诊新生儿败血症诊断具有重要的临床应用价值。