长非编码RNA(Long noncoding RNAs,Lnc RNA)广泛存在于哺乳动物体内,是一个转录本长度大于200个核苷酸,不编码蛋白质的RNA。研究发现,长非编码RNA对许多的生命活动具有十分重要的作用,lncRNA广泛参与了机体免疫、肌肉分化以及生长发育的各个过程。基于前期研究结果,获得了一个在肌组织中高表达的lncRNA-AK003290。本研究以小鼠C2C12细胞为研究模型,利用RNA干扰和超表达技术研究了lncRNA-AK003290对成肌细胞增殖和分化的影响。具体的研究结果如下:1、本研究首先利用RACE和Northern blot技术获得了AK003290的全长,其次通过CPC软件对该基因的编码能力进行了预测,发现AK003290无蛋白编码能力;且AK003290在肌肉组织中高表达,在成肌细胞分化的过程中AK003290的表达量持续上升,核质定位的结果表明在增殖期AK003290在细胞核表达,随着成肌细胞的分化,AK003290不断出细胞核,在成肌细胞分化3天时核质均有分布。2、通过干涉和超表达实验对增殖的两个标志基因ki67和N-Ras的mRNA和蛋白水平进行了检测,发现这两个基因的表达量没有变化,同时运用RTCA xCELLigence系统和Edu染色对上述的结果做了进一步的验证,结果显示AK003290对成肌细胞增殖没有显著影响。3、通过实时定量PCR、western blot和细胞免疫荧光技术研究干涉和超表达AK003290基因后对成肌细胞分化的影响,干涉AK003290后,分化标志基因MyHC、MyoG、MyoD和Trdn的mRNA水平均显著降低,MyHC和MyoG的蛋白水平表达量也明显降低,免疫荧光检测结果表明细胞融合率下降,阻滞成肌细胞向肌管分化;超表达结果同干涉结果相反,证实了AK003290正向调控成肌细胞的分化,另外,通过细胞划痕实验发现了AK003290能够促进成肌细胞的迁移。4、利用基因芯片筛选了被AK003290调控的下游靶基因,其中上调差异基因主要参与到代谢通路,下调差异基因主要涉及肌肉疾病、自噬调节等信号通路。同时通过实时荧光定量PCR随机对其中的29个差异基因进行了验证,其中25个与芯片结果一致,证明了芯片结果的可靠性。本试验结果显示AK003290能够在肌肉组织中高表达,并且对成肌细胞的迁移分化具有正调控作用。本研究为进一步阐述AK003290如何调节肌肉分化相关基因的表达提供了重要的依据,为进一步研究其在成肌细胞中的作用机理奠定了理论基础。