论文部分内容阅读
研究目的: 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是最常见及致命的恶性肿瘤之一，该病起病隐匿，发展速度快，恶性程度高，患者早期一般无明显不适，确诊时已发展至中晚期，失去最佳治疗时机。精氨酸甲基转移酶7（PRMT7）是一种单甲基化PRMT，该酶在调节DNA损伤修复、干细胞多能性和肿瘤的发生等过程的发挥了重要作用。本研究旨在探讨PRMT7在HCC中的表达情况及其与不良预后之间的关系，同时探究PRMT7在HCC恶性进展过程中的生物学作用及分子机制，寻找HCC早期诊断相关的分子标志物和药物作用靶点。 研究方法: 1.收集山东大学齐鲁医院病理科2015年的81例HCC病例及其癌旁组织，并收集各病例的临床病理参数。通过免疫组化技术检测PRMT7在HCC组织和癌旁组织中的表达差异，并使用SPSS分析其与各临床病理参数的相关性。 2.对随访成功的HCC病例，使用Log—rank检验对HCC患者生存情况进行统计分析，并应用Kaplan-Meier方法对这些病例绘制生存曲线。同时，使用COX回归模型，对这些病例进行单因素COX回归分析和多因素COX回归分析，探究与HCC预后相关的独立危险因素。 3.使用qRT-PCR技术检测正常肝细胞系L02和三种肝癌细胞系HepG2、BEL7402、SMMC-7721中PRMT7的表达水平。 4.分别过表达和敲低PRMT7后，检测HepG2细胞系增殖、迁移、侵袭能力及细胞凋亡的变化。 5.使用western blot技术检测PRMT7与增殖、EMT相关蛋白及信号通路的作用关系。 研究结果: 1.PRMT7在HCC组织中低表达，而在癌旁组织中高表达，表达模式为胞浆表达。PRMT7低表达与肿瘤直径≥5cm，AST＞40U/L、ALT＞40U/L、LDH＞250U/L具有相关性。 2.生存分析结果显示，PRMT7低表达和AFP＞100ng/ml与HCC的不良预后相关。COX回归模型分析显示，PRMT7低表达是预测HCC患者预后的独立危险因素，而AFP＞100ng/ml虽然是引起患者生存期缩短的因素，但它并不是预测HCC患者的预后的独立危险因素。 3.正常肝细胞系L02中PRMT7的表达水平要高于HCC细胞系HepG2、BEL7402和SMMC-7721，该结果与组织学实验结果一致。 4.在肝癌细胞系HepG2中，过表达PRMT7后细胞增殖、迁移、侵袭能力降低，细胞凋亡增加，敲低PRMT7后细胞增殖、迁移、侵袭能力增加，细胞凋亡减少。 5.在肝癌细胞系HepG2中，过表达PRMT7后肿瘤细胞增殖因子ki67降低，介导细胞间黏附作用的原癌基因β-Catenin表达降低，间质表型标志蛋白vimentin表达降低，EMT调控因子ZEB2表达降低，PI3K/AKT/mTOR信号通路被抑制。 研究结论: PRMT7在肝细胞癌中表现为低表达，而在癌旁组织中高表达。PRMT7的低表达使肝癌细胞具有更快的增殖、迁移和侵袭能力，并抑制肝癌细胞凋亡，这可能和ki67、β-Catenin、vimentin、ZEB2表达增加和PI3K/AKT/mTOR信号通路激活有关。