肺移植可大大提高末期肺病患者的预期寿命并显著改善生活质量。虽然免疫抑制剂已被广泛使用,但急性排斥反应仍是主要并发症之一,且普遍发生在术后第一年,所以对排斥反应的监测显得尤为重要。但目前没有可靠的血清标志物可用于监测肺移植后的排斥反应。诊断肺移植排斥的金标准是经支气管活检,但该方法是一种侵入性方法,具有副作用。因此目前临床上非常需要一种简单无创的方法用于早期准确地监测肺移植排斥。随着高通量测序技术的发展,供体来源的游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)可以作为器官移植后监测的标志物,可研究通过检测移植后患者ddcfDNA(donor-driver cell-free DNA)含量水平来判定移植排斥。首先通过模拟实验,建立供受体全基因组DNA及cfDNA提取、建库测序的有效方法,应用可有效区分供体来源cfDNA的不依赖供体的SNPs(Single Nucleotide Polymorphisms)分析方法,确定技术可行性。然后招募肺移植患者,在移植前收集供者和受者的外周血进行高通量捕获测序及基因分型,对移植后受体连续收集血浆样品进行全基因组测序,检测ddcfDNA含量变化,与临床诊断结果进行比对,验证该方法在移植排斥监测中的准确性。本研究建立了一套供受体基因组DNA及cfDNA的提取、建库测序方法,应用一套大小7.7M,含56K大小的SNPs小型捕获芯片,并通过模拟实验与临床样品证明该芯片可有效区分供受体的SNPs位点,准确检测供者来源DNA比例。同时研究了一种无需移植前供体样品的SNPs分析方法,用此方法计算的供体含量与实际供体比例呈显著性相关(R~2=0.98)。最后通过41例临床样品验证排斥反应,排斥组的ddcfDNA含量平均值±标准差(Standard Deviation,SD)为4.74±1.78%,明显高于无排斥组的ddcfDNA含量平均值±标准差1.62±0.58%。当发生排斥反应时ddcfDNA水平升高,排斥反应的指示功能与临床活检结果一致,其敏感性达到84.6%,特异性为100%。结果初步证明此方法可应用于监测肺移植后排斥反应。