论文部分内容阅读
目的:周围神经卡压是常见的、多发性损伤。这种神经损伤可造成神经功能障碍,严重影响患者的生活质量。精湛的显微外科技术为卡压后神经的再生与修复提供良好的基础。但神经卡压后,如何对其加以保护,最大限度地减轻其继发性损害,尽快恢复其传导功能,仍是目前尚未解决的难题。近年来国内、外做了大量的相关研究,发现了一些对卡压神经再生与修复有促进作用的生物活性物质和相关药物(如:神经营养因子、牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液等),并逐渐成为卡压后神经再生与修复领域的又一热点。牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液(Extract from Rabbit Skin lnflamed by Vaccinia V irus for lnjection, ERSVV)是一种国产的新型生物制剂,是由牛痘病毒疫苗致敏家兔后的皮肤组织提纯精制液,具有神经修复、镇痛、免疫调节作用。它有肌肉注射、静脉注射、腹腔注射、神经周围给药、蛛网膜下腔给药等多种给药途径。但ERSVV直接注入受损神经周围与肌肉注射对卡压后神经再生与修复有无差别尚未见报道。本实验采用SD大鼠,参照Bennett and Xie设计的坐骨神经慢性卡压模型(chronic constriction nerve injury,CCI),探讨ERSVV两种不同的给药途径对卡压后神经的再生与修复的影响。旨在为临床治疗周围神经损伤提供依据。方法:雄性SD大鼠80只,体重280±20克,随机分为4组,每组20只:A组为假手术组(正常对照组),B组为模型组(卡压对照组),C组为肌肉注射ERSVV,D组为神经周围给予ERSVV。麻醉成功后,A组仅显露右侧坐骨神经而不卡压,即闭合切口;B、C、D组分别于右侧大腿制备CCI模型,并在神经管旁置管。每天经导管注射注射用水0.2ml,防止导管阻塞。术后14天大鼠行为反应最强烈,更易激惹,取材后镜下观察到神经水肿、轴突变性、数目减少、髓鞘崩解(Guilband报道该模型建立需要14天),证明CCI模型制备成功。B组14天后继续经导管注射注射用水0.2ml直至取材. C组在B组的基础上肌肉注射ERSVV0.2ml,而D组将注射用水改为ERSVV 0.2ml直至取材。四组分别于CCI术后14天、21天、28天测大鼠的坐骨神经功能指数(Sciatic functional index,SFI)。并且在各组中随机取6只大鼠,麻醉下显露坐骨神经,观察神经的大体变化,测量神经传导速度( nerve conduction velocity, NCV )及振幅(Amplitude ,APT)并取材,在光镜和电镜下观察坐骨神经的超微结构、作图样分析计算神经轴突数目和髓鞘厚度,免疫组织化学检测神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)。结果:1.大体观察:CCI大鼠术后一般状况良好,体重无明显减轻,体毛富有光泽,觅食饮水正常。患肢活动减少、无力,足爪伸展受限,出现舔足、梳理、搔扒等症状,且逐渐加重。开始给药后,各组大鼠患肢活动逐渐恢复,症状逐渐减轻。在术后第14天,A组神经表面光滑,与周围组织组无粘连。B、C、D各组神经明显充血、水肿;卡压段神经外膜颜色较红。按拟定时间随着药物的不断应用,在术后第21、28天B组充血、水肿程度仍较重,C、D两组充血、水肿明显减轻,卡压段神经外膜的颜色逐渐变白。而D组的神经外膜颜色和水肿程度又比C组轻。2.坐骨神经功能指数(SFI):与A组比,B、C、D三组第21、28天SFI明显降低(P<0.05).与B组比,C、D两组第21、28天SFI明显升高(P<0.05),而D组明显高于C组(P<0.05)。C、D两组28天时分别与21天、14天时进行组内比较升高非常显著(P<0.05;P<0.01)。3.神经电生理指标分析:A组的NCV;AMP在各测试点无明显的变化。C、D组21、28天时高于B组而低于A组(P<0.05 ),D组高于C组(P<0.05)。组内比较:B组升高不明显差异无统计学意义(P)0.05);C、D两组28天时明显优于21天时(P<0.05),优于14天时更为明显(P<0.01)。4.轴突计数和髓鞘厚度:与A组比较,各时间点B、C、D组明显变小(P<0.05)。在第21、28天时,C、D组的均高于B组(P<0.05),D组高于C组(P<0.05),并且C、D组28天时均高于本组第14、21天时的值((P<0.05)。但B组升高不明显无统计学意义(P>0.05)。5.组织病理学观察,光镜下:A组神经纤维排列整齐,髓鞘完整。在第14天时B、C、D表现为相似的神经大量断裂,髓鞘脱落神经水肿严重,神经轴突密度减少。B组第28天时,有细小神经生长但是没有髓鞘,C组可以看到髓鞘变厚、数量增多,D组在28天时有小的并且有薄的神经髓鞘的轴突发芽。电镜下:A第14天时神经的髓鞘、神经膜细胞与基底膜结构完整,髓鞘板层清晰可见。B、C、D组髓鞘明显水肿,线粒体和微丝微管明显减少,髓鞘部分增生形状不规则神经髓板水肿。B组第28天时轴突部分断裂,脊膜消失融合,线粒体空化,板层结构破坏,微丝微管减少,损伤较轻。C组大部分脊膜消失融合,可见微丝微管,损伤较轻,髓鞘变厚,板层变规则,但D组有髓神经纤维的数量、轴突直径、髓鞘厚度、轴突内线粒体、微丝、微管、数量等均大于C组。6.免疫组织化学:A组的NGF不表达或少量表达。而B、C、D组的NGF表达在变性及再生神经纤维的轴索和雪旺细胞(SC)的胞膜均可见,表达面积大小不一,界限欠清楚,呈棕黄色弥漫性着色。图像分析结果显示: NGF的平均灰度指数:B、C、D组在21、28天逐渐增加; C、D组大于B组,D组大于C组(P<0.05)。并且C、D组第28天时与本组14、21天比明显增多(P<0.05)。结论:1 ERSVV有利于损伤神经的再生与修复。2 ERSVV神经周围给药对受损神经的再生与修复作用比肌肉注射更好。