【摘 要】
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目的：研究TSP2-8CUB1+2片段是否决定血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)合成后细胞内运输的方向，了解金属蛋白酶ADAMTS13羧基端结构与功能的关系，为临床了解和治疗血栓性血小板减
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目的：研究TSP2-8CUB1+2片段是否决定血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)合成后细胞内运输的方向，了解金属蛋白酶ADAMTS13羧基端结构与功能的关系，为临床了解和治疗血栓性血小板减少性紫癜疾病提供理论依据。
方法：采用聚合酶链式反应及DNA重组技术构建pcDNA3.1-ADAMTS13及pcDNA3.1-delTSP2-8CUB1+2ADAMTS13重组质粒；用脂质体转染技术将重组质粒分别转染犬肾上皮极性细胞MDCK，筛选出阳性细胞克隆后传代铺到中间有特殊分子筛膜的双池培养皿内培养，细胞生长到无空隙后收集上、下池培养液；通过Western Blot检测上、下池培养液中ADAMTS13蛋白表达水平，以对比分析ADAMTS13蛋白在极性细胞内的分泌方向。
结果：
1. 经PCR扩增、酶切电泳分析和DNA测序证实，本实验构建的重组质粒目的基因片段为人delTSP2-8CUB1+2ADAMTS13-cDNA。
2. 稳定表达野生型ADAMTS13的MDCK细胞培养于特殊分子筛膜上后，通过Western Blot仅在膜的上池培养液中检测到ADAMTS13蛋白。
3. 稳定表达缺失TSP2-8CUB1+2区域ADAMTS13的MDCK细胞培养于特殊分子筛膜上后，利用Western Blot在膜的上、下池培养液中均检测到ADAMTS13重组蛋白。
结论：
1. 金属蛋白酶ADAMTS13的分泌是有极性的。
2. 羧基端TSP2-8CUB1+2结构域与ADAMTS13合成后细胞内的运输方向密切相关。
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