论文部分内容阅读
目的:探讨高良姜素对人胶质母细胞瘤U87和U251细胞系增殖、侵袭和迁移能力的影响,及其抗癌作用的相关机制,为高良姜素临床治疗人胶质母细胞瘤提供体外实验理论基础。方法:(1)体外常规培养人脑胶质瘤细胞系U87、U251;(2)用CCK-8法检测不同浓度高良姜素(10、20μmol/L)作用人脑胶质瘤细胞系U87、U251细胞24小时后细胞存活率的变化;(3)采用划痕实验、Transwell实验检测不同浓度高良姜素(10、20μmol/L)作用24 h后人脑胶质瘤细胞系U87、U251细胞迁移、侵袭能力的变化;(4)采用Western blotting方法检测不同浓度高良姜素(10、20μmol/L)处理后人脑胶质瘤细胞系U87、U251中转化生长因子β(TGF-β)的表达情况。(5)使用质粒转染过表达TGF-β,观察高良姜素对过表达TGF-β的细胞系迁移、侵袭能力的影响。结果:(1)CCK-8实验结果示:以0μmol/L高良姜素组为参照,10、20μmol/L高良姜素组的细胞存活率减低,差异有统计学意义(P<0.05)。与0、10μmol/L高良姜素组比较,20μmol/L高良姜素细胞存活率明显下降,30.52%,差异有统计学意义(P<0.05)。提示高良姜素抑制人胶质瘤U87细胞系的增殖,且抑制程度与药物浓度呈相关性。(2)划痕实验结果示:以0μmol/L高良姜素组为参照,10、20μmol/L高良姜素组的细胞迁移能力减低,U87细胞的伤口愈合百分比分别为(47.91±2.14)%、(40.50±1.24)%、(7.36±1.45)%,U251细胞的伤口愈合百分比分别为(48.28±2.74)%,(40.77±2.23)%,(9.54±1.18)%。差异有统计学意义(P<0.001)。且20μmol/L高良姜素的细胞迁移能力低于10umol/L组,差异具有统计学意义(P<0.05)。可见,高姜良素可抑制U87、U251细胞的迁移,抑制作用呈浓度依赖性,浓度越高,抑制作用越强。(3)Transwell实验结果示:与0μmol/L高良姜素组相比,10、20umol/L高良姜素组U87侵袭到达下室的细胞数目减少(66.67±21.17,216.67±20.55,61.67±6.43),差异有统计学意义(P<0.001)。各组U251侵袭到达下室的细胞数目也同样减少(449.33±24.17,292±8.19,129.33±15.01),差异有统计学意义(P<0.001)。可见不同浓度的高姜良素可以抑制U87、U251细胞的侵袭能力。与10umol/L高良姜素组相比,20umol/L高良姜素组侵袭到达下室的细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),可见高良姜素对U87、U251细胞侵袭能力的抑制作用呈浓度依赖性,浓度越高,抑制作用越强。(4)Western blotting实验结果示:0、10、20μmol/L高姜良素作用U87、U251细胞TGFβ蛋白表达量逐渐下降(U87细胞TGF-β灰度值分别为:1.00±0.00、0.42±0.04、0.24±0.04;U251细胞TGF-β灰度值分别为1.00±0.00、0.52±0.04、0.30±0.04),浓度为20μmol/L高良姜素的U87、U251细胞TGF-β蛋白表达最低,差异有统计学意义(P<0.05),可见高良姜素可以抑制TGF-β的表达,浓度越高抑制作用越强。(5)采用质粒转染过表达TGF-β,(1)Western blotting结果显示0μmol/L高良姜素组、20μmol/L高良姜素组、TGF-β过表达组、TGF-β过表达+20μmol/L高良姜素组U87细胞TFG-β相对表达量依次为1.00±0.00、0.43±0.08、1.63±0.21、0.78±0.05;U251细胞TFG-β相对表达量依次为1.00±0.00、0.29±0.04、1.98±0.20、0.86±0.06。与对照组相比,TGF-β过表达组TFGβ的表达量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),提示质粒转染过表达TGF-β实验成功。与TGF-β过表达组相比、TGF-β过表达+20μmol/L高良姜素组TGF-β的表达也明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05),提示高良姜素可以抑制TGF-β的表达。(2)伤口愈合实验检测结果:0μmol/L高良姜素组、20μmol/L高良姜素组、TGF-β过表达组、TGF-β过表达+20μmol/L高良姜素组U87细胞伤口愈合百分比依次为(45.46±3.01)%、(6.97±1.92)%、(61.01±4.62)%、(29.94±4.73)%。U251细胞分别为(51.11±5.97)%、(9.14±2.19)%、(65.57±7.31)%、(36.50±4.48)%。与0umol/L高良姜素组相比,TGFβ过表达组伤口愈合百分比明显增加,差异有统计学意义(P<0.001),提示TGF-β过表达可以增加U87、U251细胞的迁移能力。而与TGF-β过表达组相比,TGFβ过表达+20μmol/L高良姜素组U87细胞的伤口愈合百分比降低,差异有统计学意义(P<0.05),提示高良姜素可能通过阻断TGF-β来抑制U87、U251细胞的迁移作用。(3)Transwell实验结果显示:0μmol/L高良姜素组、20μmol/L高良姜素组、TGF-β过表达组、TGF-β过表达+20μmol/L高良姜素组U87细胞侵袭到达下室的数目依次为380.67±35.73、61.67±6.43、452.00±31.00、145.00±19.08。U251细胞各组侵袭到达下室的数目分别为460.67±41.19、108.00±21.66、579.00±27.87、207.33±22.18。与0umol/L高良姜素组相比,TGF-β过表达组细胞侵袭数量明显增加,差异有统计学意义(P<0.001),提示TGF-β过表达可以增加U87、U251细胞的侵袭能力。而与TGF-β过表达组相比,TGF-β过表达+20μmol/L高良姜素组U87、U251细胞的侵袭能力降低,差异有统计学意义(P<0.05),提示高良姜素可能通过阻断TGF-β来抑制U87、U251细胞的侵袭能力结论:高良姜素可以通过阻断TGF-β来抑制人脑胶质瘤母细胞U87和U251的增值、迁移和侵袭。